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问
流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙?
崔果儿
加氯化钙的目的应该是使细胞内钙达到饱和
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问
求助!药物诱导细胞凋亡的实验,请求解答
小小袋袋
Q2+ Q4就是所有凋亡的细胞率,spss后续可以对组间进行t检验或者秩和分析,一次不够,我觉得最少三次
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问
关于细胞冻存 DMSO 浓度
生物技术学生
冻存时细胞浓度是关键,要是细胞浓度过低,因为冻存后会有很多细胞死掉,所以要多一些细胞复苏时容易长起来,我们也样 G2 和 60,我们用的是纯血清或者完培加终浓度为 10% 的 DMSO 后,直接放到 - 80 冰箱里都可以复苏我的完陪 + 20%FBS+10%DMSO, 存活率和绝对活细胞量都很低,有的全死。冻存的细胞量和浓度都很大的
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问
BCA测蛋白浓度相关问题
隔壁家的小夜猫子
确定你每个点都在标曲信任范围内么,另外稀释的时候取液太小不容易取准,建议梯度稀释。
20 回答
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问
蛋白切割PH调节相关问题
一支肾上腺素
如果提高溶液的PH值,那么就要在溶液中加入大于这个PH的溶液;如果要降低溶液的PH值,那么可以加入小于这个溶液PH的溶液。在调节溶液PH的过程中,应该随时监测溶液PH的变化。
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问
sumo蛋白酶切不开带sumo标签的蛋白的原因?
dxy_d4xj2yg7
1. SUMO酶活性不佳,加对照蛋白验证酶活性有没有问题。2. 有可能是蛋白结构问题,标签的结构可能不正确,酶无法识别标签。可以考虑换个其他标签,比如EK,3C等。
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问
K48、K63泛素蛋白质粒表达出来的泛素有何不同?
lzy必有我师
K48就是一般设计目标蛋白的降解,连接仍然是细胞通过蛋白水解降解维持体内平衡的关键途径最远端的泛素第48位赖氨酸被精氨酸取代,限制链长。 K63连接的多泛素化修饰蛋白质已经涉及DNA损伤反应的调节,内体分选,蛋白质错误折叠/聚集的自噬等细胞过程和神经退行性病变。这些四泛素链是由野生型泛素的酶促连接产生的。最远端的泛素含有精氨酸取代赖氨酸第63位,限制链长K63一般涉及翻译后修饰的功能获得或者失活。
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问
要送LC/MS液相色谱-质谱检测的co-IP胶条,操作全程注意事项?
一支肾上腺素
注意安全,有些试剂毒性很大,特别是后面处理,每一步都要小心注意。
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问
多肽浓度会比蛋白浓度还要高的原因?
JCorona
原因:1.蛋白质具有三级结构,许多折叠、卷曲的部位往往无法被检测到,造成检测值偏低,酶解后许多被隐藏的信号释放到表面,检测值趋近于真实值;2.酶本身也是蛋白质,若是酶的添加量过多,则酶会催化自身水解,造成多肽量增多
16 回答
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问
蛋白质质谱组学相关问题
医往情深丁香园
应该是不能用了,时间有点长,建议重新做一次吧,不然试试重新做也行。
18 回答
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问
IB条带模糊/无条带的原因?
lzy必有我师
:1.确定B的抗体是否适合做IP。 2.确定样本中B的含量是否太低。3.还有就是AB之间不存在互作。
17 回答
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问
目的蛋白和内参的条带形状反方向弯曲的原因?
lzy必有我师
如果蛋白样品足够的话还是建议跑两块胶,分别看内参和蛋白;如果一定要在同一张膜上面看的话,可以先看目标蛋白的表达,再用stripping buffer孵育去除一抗,再重新封闭,按照一样的步骤看内参,但这种方法比较不好掌控,stripping不到位,原本的抗体会有残留,stripping过度的话,再看内参的信号会很差
19 回答
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问
为什么有的蛋白可以测磷酸化有的测不了?
一支肾上腺素
磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分,处理不得当时,还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多,比如封闭问题,抗体问题,或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。
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问
WB内参跑不齐的原因是什么?
隔壁家的小夜猫子
细胞收的时候量不一样,测浓度,重新normalize
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问
目的抗体杂带太多,背景杂乱怎么办?
verbalkint
抗体不好,要么做ip检测,要么直接用标签抗体(gfp)不要用蛋白自己的抗体
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问
WB转膜10KD的蛋白电转条件?
医往情深丁香园
我们湿转时转膜液中一般都是不加SDS的,而甲醇是必须加的,量通常在100-200ml,我们在做12KDa时甲醇150ml,条带ok,转膜液中改加甲醇试试吧。
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问
目的蛋白和内参实测分子量都比预期大是什么原因?
一支肾上腺素
因为内参有好几种,分子量差别也比较大,更换分子量与检测蛋白差距更大的内参就可以避免这个问题。
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问
细胞蛋白做WB无趋势的原因?
隔壁家的小夜猫子
点太多了,你想看趋势的时候尽量少点,可以摸索几次,点少了之后内参也可能能更清楚地看出并不齐,可能需要重新normalize
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问
抗体相关问题
一支肾上腺素
一般来说,不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系,来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里, 如双标实验里,如果其中一个一抗是山羊来源的,一个是小鼠来源的,则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。
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问
有目的蛋白却没有actin和tublin的原因?
隔壁家的小夜猫子
gapdh这不是挺好的么,你那个基因可能影响贝塔actin表达了,用gap,不放心再用个别的内参试试。
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