IB条带模糊/无条带的原因？

17 个回答

lzy必有我师

2022-01-21

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:1.确定B的抗体是否适合做IP。 2.确定样本中B的含量是否太低。3.还有就是AB之间不存在互作。

隔壁家的小夜猫子

2022-01-21

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鉴于你input条带挺清楚的，你这个应该就是没互作，或者是很弱

红格子一号

2022-01-21

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可能时间不够，建议分泳道曝光，或者，抗体加错了

一支肾上腺素

2022-01-21

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如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，ECL发光液失效。另外如果转膜出现了问题，

医往情深丁香园

2022-01-21

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转膜时间太短导致目标蛋白没有充分转移到膜上，或者转膜时间太长导致样品转穿。

ZZDX-YILILI

2022-01-21

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根据你的描述实验过程基本没有问题，并且input和IP A条带看着是没问题的，B没有显示出来原因可能是以下几点:1.确定B的抗体是否适合做IP。 2.确定样本中B的含量是否太低。3.还有就是AB之间不存在互作。

dxy_h7vcp8v3

2022-01-21

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B蛋白没有条带，考虑B蛋白相教于A蛋白的分子量小了10倍，同一块胶上跑胶的话，检查是否B蛋白跑出蛋白胶条。因此转膜没有蛋白条带。其次，B蛋白可能未与磁珠结合，没有相互作用，因此B蛋白WB没有条带。最后，检查A B蛋白转膜过程中的差异地方，排除是因为转膜过程试剂的原因，例如检查B蛋白抗体是否正常。

dxy_bq4uxnd

2022-01-21

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是已经确认一定会有相互作用的蛋白吗？如果不是已经确认一定会有相互作用的蛋白质，那么IP B没有条带也是很正常的事情吧，没有相互作用怎么可能有条带。如果确认一定会有相互作用，那么把A B两个泳道剪开，分开显影，可能是蛋白丰度不同，导致所需曝光时间不同，A蛋白表达量太多，影响了B的显影。

jey1235

2022-01-21

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这个问题非常典型。你的实验操作基本没有问题甚至可以说比较规范。IB 抗体的问题不存在，WB问题基本不存在。但是忽略了一个细节，我个人经验是2个分子量相差这么大的分子去检测互作，假设在有互作的情况下一般是用小蛋白去做bait，效果会明显好于大蛋白去做bait。一个主要原因是大分子通常结构复杂存在较大空间位阻，小分子就不一样了。