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目的蛋白和内参实测分子量都比预期大是什么原因？

相关实验：蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)

丁香实验

2022-01-12

最近在跑一个17kd的小分子蛋白，胶用的是12%的浓缩胶，但是每次wb结果内参和目的蛋白都比Marker位置高，目的蛋白预测值在17kd左右，实测值在26kd左右，内参用的gapdh，预测值在36kd左右，实测值在54kd左右，各位大佬帮帮忙，到底是什么原因导致的呢？

19 个回答

一支肾上腺素

2022-01-21

有帮助

因为内参有好几种，分子量差别也比较大，更换分子量与检测蛋白差距更大的内参就可以避免这个问题。

红格子一号

2022-01-21

有帮助

可能在体内经过了翻译后修饰，被修饰上了其他的东西，

ZZDX-YILILI

2022-01-21

有帮助

1.确定下蛋白是内源蛋白还是重组蛋白。 2.确定下你的蛋白是不是存在不同亚型。 3.确定目的蛋白是否存在翻译后修饰。 4是不是多聚体蛋白。

dxy_bq4uxnd

2022-01-21

有帮助

如果大的不多的话可能是正常现象，蛋白质在体内都会经过修饰，大小会发生变化，如果偏差太大会不会是蛋白marker有问题

水深先试浅

2022-01-20

有帮助

电压设置问题吧，或者分离胶配制不够合理导致的

verbalkint

2022-01-20

有帮助

和胶的成分有关，一定要混匀；另外有可能是marker的问题。如果全都偏大其实对结果影响不大

隔壁家的小夜猫子

2022-01-20

有帮助

浓缩胶的浓度没记错的话应该是6或者更低吧，而且PH低，你这个应该就是没浓缩好的时候marker就分开了，所以marker不准了

小布丁瑶瑶

2022-01-20

有帮助

可以先用一抗孵育显色和检测，再用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参的抗体孵育显色检测。这样也可以将检测蛋白和内参显色在同一张膜上

dxy_h7vcp8v3

2022-01-20

有帮助

目的蛋白跑胶比自己目的蛋白条带高，首先仔细检查是否大的那个蛋白是你自己的目的蛋白。如果是，检查PAGE胶是否制备错误，可以选择15%的凝胶在跑一次，如果还是大，检查样品buffer里是否混有与蛋白结合的杂质DNA或者杂蛋白，导致蛋白条带偏大。其次，跑胶时带一个别人的蛋白质确定下自己的胶没有问题。最后，检查蛋白marker，是否自己看错条带。