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实验问答

29,638,579 科研人在看

问想问一下是用的哪家提外泌体的试剂盒呢？

萧莣苼

国内的厂家可以试试宇玫博，针对上清等都有开发对应的提取试剂盒

1 回答36 围观

问请问高效液相色谱法的加样回收率应该怎么做。

萧莣苼

你目前的方案在操作逻辑上是不可行的，加样回收率（Spiked Recovery）的核心定义是：将已知量的标准品加入到“未处理的样品粉末”中，然后按照样品制备的完整流程进行提取和测定。你提出的方案是将标准品加到“上清液”中，这在分析化学中称为“基质加标”或“后加标”，只能考察基质效应或仪器稳定性，无法考察提取过程（离心、溶剂提取）造成的损失，因此不能作为加样回收率。

1 回答159 围观

问请教：HepG2细胞形态及胰酶处理方法

162 围观

问脂肪细胞提取RNA和蛋白质具体流程

dxy_v27c8it4

1 回答370 围观

问求问各位前辈，怎样在TriZoL法提取B16F10 RNA的过程中，避免黑色素对后续检测的干扰？

萧莣苼

增加Trizol用量：黑色素含量高时，适当增加Trizol的比例，通过稀释作用降低黑色素浓度。增加离心步骤：先将细胞裂解液在4°C下12,000g离心10分钟。黑色素和细胞碎片会形成黑色沉淀，只取上层清液进行后续操作。

1 回答216 围观

问人脂肪细胞原代培养及后续处理方案

dxy_ohhxnzh2

脂肪细胞的原代培养方法看这里：https://www.biomart.cn/lab-web/method/316rdpago2jmv.ht

2 回答242 围观

问请教各位老师，WB实验曝光完，为啥marker那边有一个杂带是从隔壁泳道跑过来的？

萧莣苼

应该是泳道间交叉污染了吧，样本在电泳过程或转膜过程中发生了侧向扩散。可以考虑调整下：减小上样量：你的样本条带已经明显过载（Overloaded），建议稀释后再上样，这样条带也会更漂亮，减少拖尾和串道。留出空位：在 Marker 和第一个样本之间留一个空道，加 Loading Buffer。检查胶质量：拔梳子要稳，确保孔壁完整。

1 回答229 围观

问毕赤酵母蛋白表达的实验步骤有全的吗？

萧莣苼

看这里有两个操作方法：https://www.biomart.cn/lab-web/exp/316nrkago405u/316nrmigo4ka0.html

1 回答208 围观

问哪位大神知道，Elispot实验必须用仪器检测吗，可以用倒置显微镜拍吗，审稿人会不会不认？

萧莣苼

ELISpot 实验不需要强制使用昂贵的专用全自动读板仪，倒置显微镜可以用于计数，在投稿时需要注意操作规范，以避免审稿人质疑结果的客观性，ELISpot 的标准计数方式一直包含“显微镜观察”这一选项。技术层面：只要显微镜能够清晰显示 PVDF 膜上的斑点，并配合合适的放大倍数（通常 2x-10x 即可），就可以完成手动计数。文献支持：许多权威免疫学实验手册（如 Protocol Exchang

1 回答185 围观

问请问这是黑胶虫污染吗

dxyc42u

你这个比较大，应该不是黑胶虫污染

1 回答1866 围观

问外泌体WB出现Grp94阳性条带和离心有关吗？

啊啊啊洛飞

Grp94 阳性通常不是 10,000×g 这一步离心的直接后果，而是整个前处理流程不彻底导致的交叉污染。

1 回答224 围观

问SDD检测MAVS多聚体

诶哇医学僧

我最近也在做，不知道方不方便交流一下

4 回答565 围观

问求一个类器官免疫组化/荧光的protocol？

sese0209

去基质胶（二选一）：低温法：4℃传代缓冲液静置 10 min，300g 离心。酶解法：1 mg / mL Dispase 37℃ 20 min，离心。后续染色路径：整体染色（保留基质胶）：直接 4% PFA 固定 → 0.5% Triton X-100 透膜 → 抗体孵育（适合 < 300 μm 类器官）。切片染色：固定后琼脂糖预包埋 → 石蜡切片（4-5 μm）→ 柠檬酸抗原修复（必须做，

1 回答408 围观

问实验动物肝脏的拍照

baseball2007

后期PS加的，照的时候放把尺子标记

4 回答3359 围观

问跑wb制胶，为什么下层胶老是有气泡，灌了胶压了胶5分钟都没有，为什么5分钟之后下层就会有气泡

balalaLy

如果是最底下有气泡是没有影响的，如果是中间有气泡可能是玻璃板没有洗干净，灌完胶可以轻轻敲一下玻璃板，使气泡往上跑。

4 回答5906 围观

问小鼠光遗传病毒注射？正常病毒和cre病毒的区别

sese0209

后一种（双病毒 + Cre-loxP 系统）的主要优点是：使用强启动子（EF1a）驱动 ChR2，表达量更高、光遗传操控效果更好，同时可借助 Cre 依赖实现更严格的特异性和灵活性（便于与其他 Cre 品系或工具联用）。前一种虽然简单，但 VGAT1 启动子驱动效率相对较弱，可能影响实验效果。

2 回答1244 围观

问细胞缺氧复氧问题，感谢大神指点

Dr_劉医生

细胞缺氧小室换气一般10min就可以了，具体缺氧和复氧的操作可以参考下图：

4 回答2435 围观

问NCI-H716细胞分化问题

鼻涕虫大王

请问你是用哪款基质胶啊。。。。。

4 回答656 围观

问过滤器膜是怎么选择的呢？

Wendy滕彩英

47mm在线可换膜过滤器，值得拥有

5 回答924 围观

问WB曝光选择电子照胶仪好还是胶片曝光好？利弊分析？

蛋白赵博

胶片的做法难度大一些，但是可以长期保存做为实验证据，安全性更好一些电子照片做法简单适合新手小白

6 回答2157 围观

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