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问
家人们想自己配置碱裂解法质粒提取的试剂的话对采购的原料纯度要求高吗?
萧莣苼
Tris、EDTA、NaOH、SDS、乙酸钾、冰醋酸、葡萄糖、NaCl 等常规溶质 AR 级杂质含量对质粒提取的影响极小,只要没有明显的重金属或强氧化性杂质即可。SDS 买质量稳定的品牌即可,不需要特意分子生物学级。水:这是最容易被忽视但最关键的一环。必须用 Milli-Q 超纯水 或 DEPC 处理水(注意 DEPC 对 Tris 有反应,配含 Tris 的溶液时建议用焦碳酸二乙酯处理水后再高压
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问
thp-1诱导成M1加ox-ldl,可以同步加吗,同步的话M1药物浓度要降低吗?
dxy_26no3ak
可以同步加,但建议优化时序。THP-1用PMA 100nM诱导48h贴壁,再换无血清培养基静息24h。同步方案:LPS 100ng/mL + IFN-γ 20ng/mL与ox-LDL 50-100μg/mL同时加入,刺激24-48h。M1诱导剂浓度通常不需降低,但需预实验验证:设ox-LDL梯度(25/50/100μg/mL),检测CD86、iNOS、CD206表达及细胞存活率。注意:ox-LDL
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问
请教一下各位大佬,用旧菌液划平板是不是小的单菌落质粒拷贝数才比较高啊?
萧莣苼
在平板上长出的单菌落大还是小,主要取决于细菌的生长状态和分裂速度,不是质粒拷贝数的高低。高拷贝数的质粒反而常常让菌落变小。
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问
求购实验室用的纯种褶皱臂尾轮虫休眠卵活体都可以,纯种小球藻
萧莣苼
建议去这两个库问问:中国科学院水生生物研究所 - 国家水生生物种质资源库(淡水藻种库 FACHB)、中国海洋大学 - 海洋藻类种质资源库
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问
大肠杆菌种子液放4度久了重新培养出来的菌质粒浓度比以前低了是怎么回事?
dxy_54pzhrx
4度长期存放导致质粒拷贝数下降或菌体活力降低。建议:1)从原始甘油保种管重新划板挑单克隆;2)检查抗生素浓度是否降解,必要时补加;3)控制摇床培养温度37度、转速200-250 rpm、时间12-16 h;4)收菌时OD600控制在2-4。避免反复使用4度存放种子液。
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问
Mira Fl Plus
萧莣苼
MiraFLPlus是Countstar的台式全自动荧光细胞分析仪,你是要这款设备吗?
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问
想问一下加了MSX的培养基在2-8的冰箱能放多久啊
萧莣苼
MSX(甲硫氨酸亚砜亚胺)在2-8°C通常可稳定保存2-4周,10天一般没问题。过滤除菌后避光冷藏,稳定性较好,建议分装避光保存,使用前检查沉淀或变色。若用于细胞筛选,建议做对照验证抑制效果。
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问
筛选THP-1细胞极化成M0细胞后在X线照射下的最适剂量和所用药物的浓度,但是照射后M0细胞肥大OD值随照射剂量升高
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问
想问一下是用的哪家提外泌体的试剂盒呢?
萧莣苼
国内的厂家可以试试宇玫博,针对上清等都有开发对应的提取试剂盒
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问
补体介导的细胞毒试验 小鼠胸腺细胞 图片
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问
细胞染色,一直染不上色是什么原因呢,严格按照说明书进行的
dxy_i1yyhfve
testtesttesttesttesttest
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问
蛋白挂不上柱子,都到了流穿液里面
feifei4472
挂不上柱可能是his标签没有完全暴露出来,可以尝试降低结合缓冲液中咪唑浓度试试
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问
A498细胞怎么这样了,是真菌感染吗?
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问
实验做了小鼠肺泡灌洗,由于后续打算提肺组织单细胞悬液上流式,想问下肺泡灌洗时需要结扎一侧肺再灌洗,留未灌洗肺提单细胞悬液!
dxy_3irtfin4
老师想问下您最后是怎么处理的!感谢
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问
(小白提问)请问对肿瘤细胞系构建过表达和敲低组时,用来对照的OE-NC和si-NC分别进行了什么处理呢?
dxy_mqg1dtg8
你的理解是对的。对于过表达实验,实验组会将目的基因的过表达质粒转染到肿瘤细胞系中,而OE-NC组则是将空质粒转染到肿瘤细胞系中作为对照。因为空质粒不会对目的基因表达产生影响,所以OE-NC组可以作为背景噪音的对照。对于敲低实验,实验组会使用siRNA转染将目的基因敲低,而对照组则会使用阴性对照siRNA转染,通常选择与目的siRNA序列无关的、不会对目标基因表达产生影响的siRNA作为阴性对照。这
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问
同源重组的原理是什么呀 同源臂是什么呀?为什么同源重组的酶可以不用考虑目的片段上有没有呀
汤姆卜丽波
同源重组又称一般性重组。同源重组发生在DNA的同源序列之间,通过配对、链的断裂和再连接,而产生片段交换的过程,是最基本的重组方式,同源臂是指两个DNA片段之间的相似性,主要是因为有同源序列,所以不同考虑目的片段
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问
求教 细胞免疫荧光染色顺序
dxy_wq08m8r2
求教我们用DAPI,鬼笔环肽,尼罗红细胞核,肌鞘,脂质有详细的实验步骤吗
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问
皮肤组织提RNA如何研磨。
dxyc42u
可以选择用超声或者组织研磨仪。
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问
Protein a纯化
dxy_44p7ua8
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问
分泌性蛋白浓缩后做WB,如何选择内参?
xumusuo301
分泌型的蛋白必须浓缩,浓缩方法就用蛋白离心管离心后用BCA定量。做WB都需要内参。不同蛋白需要的内参不一样,可以根据需要选择。
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