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实验问答

31,780,237 科研人在看

问在免疫组织化学的染色过程中，脱片产生的原因和如何防止脱片？

郭郭的郭郭

1.多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的，后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子，要好一点。2.组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切得厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。3.组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。4.没烤好，时间短温度不够之类。

2 回答902 围观

问消除过氧化物酶，用过氧化氢的多吗？成品的内源性氧化物酶阻断剂效果咋样？

小布丁瑶瑶

消除过氧化物酶实验室用过氧化氢挺多的，成品的内源性氧化物阻断剂过氧化酶是催化剂，是蛋白质成分，效果挺好的，希望帮到您喔。

1 回答703 围观

问放射免疫测定时，胰岛素释放试验的曲线特点？

此用户已注销

（1）胰岛素分泌不足型：为试验曲线呈低水平状态，表示胰岛功能衰竭或遭到严重破坏，说明胰岛素分泌绝对不足，见于胰岛素依赖型糖尿病，需终身胰岛素治疗。（2）胰岛素分泌增多型：患者空腹胰岛素水平正常或高于正常，刺激后曲线上升迟缓，高峰在2小时或3小时，多数在2小时达到高峰，其峰值明显高于正常值，提示胰岛素分泌相对不足，多见于非胰岛素依赖型肥胖者。该型患者经严格控制饮食、增加运动、减轻体重或服用降血糖药物

1 回答734 围观

问免疫荧光是选石蜡切片好还是冰冻切片好？

Kimser

个人倾向于石蜡切片，毕竟条件有限，虽然可能稍微麻烦点，时间长点，但是保存的时间也长，这点挺不错的

2 回答1427 围观

问双向免疫扩散实验怎么判断抗原蛋白相对浓度？

此用户已注销

当两者在最适当比例处相遇时，即形成一条清晰的沉淀线。根据有否出现沉淀线，可用已知的抗体鉴定未知的抗原，或用已知的抗原鉴定未知的抗体。沉淀线靠近抗原孔，则提示抗体含量大；靠近抗体孔，则提示抗原含量较多；不出现沉淀线则表明抗体或抗原的缺乏或抗原过剩；另外，如出现多条沉淀线,则说明抗原和抗体皆不是单一的成分。因此，可用于鉴定抗原或抗体的纯度。

2 回答947 围观

问所有底物在孵育之前都要避光吗？

yfcwyh

ELISA实验中，在酶标抗体孵育，以及显色底物孵育这两步建议避光，其他步骤无需避光。避光可采用锡纸包裹，或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。

1 回答694 围观

问请问流式细胞术染CD4 CD8 CD3的时候能否先固定，再染色？

dxywode

标本采集后要及时固定或深低温保存，以免组织发生自溶，DNA降解，而造成测试结果的误差。

4 回答1369 围观

问Western Blot转膜失败是为什么

小暮

(1) 膜没有完全均匀湿透使用 100% methanol 浸透膜。(2) 靶蛋白分子量小于 10 000选择小孔径的膜，缩短转移时间。(3) 靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液 pH 值可尝试使用其他缓冲液如 CAPS 缓冲液（pH 10.5) 或使用低 pH 值缓冲液如乙酸缓冲液。(4) 甲醇浓度过高过高甲醇浓度会导致蛋白质与 SDS 分离，从而沉淀在凝胶中，同时会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分

4 回答1182 围观

问酶联免疫吸附试验中的酶结合物中对酶的要求有哪些？该怎么选择？

郭郭的郭郭

酶的要求：一个酶蛋白分子每分钟可催化103～104个底物分子转变成有色产物。用于标记的酶应符合：首先活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。然后易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。并且作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。还要用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激

3 回答981 围观

问染色不清楚的原因是什么？

dxywode

应该是染液的问题哦，缓冲液的PH也有关系，最好在显微镜下边染色边观察。

3 回答1648 围观

问Elisa测定中出现了问题，可能会有哪些原因呢

dxywode

标准曲线较差、无信号、变异系数较大

3 回答988 围观

问石蜡切片在染色过程中总出现脱片现象的原因是？

此用户已注销

3 回答1896 围观

问目前有哪些成熟的技术已经应用的有哪些这些应用会人类带来哪些变化整体的发展方向是什么这其中有什么样的个人发展机会

郭郭的郭郭

机器人手术革新，机器人手术用于微创手术，有助于提高精确度，控制力和灵活性。在手术机器人帮助下，外科医生可以执行非常复杂的手术，否则这些手术非常困难或不可能执行。随着技术的改进，它可以与增强现实相结合，以允许外科医生在操作的同时实时查看患者的其他重要信息。虽然手术机器人的发明引起了人们对机器人最终将取代人类外科医生的担忧，但它很可能仅用于协助和增强外科医生的工作。

3 回答1107 围观

问常用的去除内源性酶的方法是3%过氧化氢水溶液。但在含有丰富血细胞的标本中，会有气泡现象，是否有可替代去除方法呢？

郭郭的郭郭

如果采用过氧化物酶的检测系统，必须进行内源性过氧化物酶封闭处理。代替过氧化氢水溶液，加还原性物质比较好，硫代硫酸钠、亚硫酸钠、保险粉之类的。方便搞到酶的话，酶也是不错的。另外，你最好说一下水里还有什么产物，看一下对这些东西对你的产物有没有影响。降温，加入亚硫酸钠水溶液洗涤就好了，双氧水在高温情况下，对你产品看否有影响的。如果有，那就改方法，萃取出来，分相，再去亚硫酸钠洗涤的。

3 回答918 围观

问电泳液PH没问题，电极也没插反，为什么跑不出条带？

郭郭的郭郭

这个有许多原因，跑电泳有对照吗？比如marker.如果没有就是电泳问题，如果有，你看下有没有引物二聚体，如果没有，pcr整体肯定忘加东西了，需重做，如果有，就是你pcr体系本身有问题，需要优化，或是你的引物不好，需重新设计。还有就是琼脂糖里面忘记加溴化乙锭了，这个也有可能。

3 回答729 围观

问胰腺组织样本如何处理？

郭郭的郭郭

胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。胰腺组织含多种类型的细胞，要想提取胰岛A细胞的RNA，首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来，可以用流式细胞分选或磁珠分选等。获得高纯度的胰岛A细胞后，再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了。

3 回答2027 围观

问影响淋巴细胞转化的因素有哪些?

此用户已注销

⑴、受体细胞转化的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的突变株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，它可容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。另外还应根据载体的性质及实验的目的选择合适的宿主。此外，受体细胞生长状态和密度也很重要。不要使用经过多次转接或储存于4℃的培养菌。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，密度过高或不足均会影响转化率。⑵、载体DNA和重组DNA方面载体本身性质决定了转化的

3 回答1030 围观

问对流免疫电流里，为什么抗原必须加在接电源阴极的孔呢？

郭郭的郭郭

跟在缓冲液中抗原抗体所带的电荷以及两者泳动的方向有关。在pH值8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白只带有微弱的负电荷，而且它分子又较大，所以泳动慢，受电渗作用的影响也大，往往不能抵抗电渗作用，故在电泳时，反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较强的负电荷，分子又较小，所以泳动快，虽然由于电渗作用泳动速度减慢，但仍能向正极泳动。

3 回答824 围观

问实验中，双向免疫扩散实验测得抗体效价为1：2，而ELISA实验测得得抗体效价却是1：32000，为什么差距？这么大？

府宅

在筛选抗体的时候，要看抗原表位位置，如果是线性表位，重组蛋白筛选没问题，如果非线性表位或者复杂结构包含着的，如果用重组蛋白表达出来，表位结构可能与真实结构不一致，从而导致筛选出来的抗体，并非真实表位相对的抗体，所以ELISA结果会有差距大

2 回答865 围观

问用目标蛋白做IP，WB的时候孵Ub，但是目标条带位置没有ladder，该怎么改善条件？

dxywode

你可以加 NEM 抑制去泛素酶（DUB）的活性，或者干脆用 denaturing IP 去拉目的蛋白，然后检测泛素化。如果真的很难做，可以试试看过表达目的蛋白，再 IP ，当然无论如何也要用 NEM 或者 denaturing IP.

3 回答1115 围观

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