蛋白切割PH调节相关问题
丁香实验
最近在做小分子量蛋白纯化，使用gst和his标签链接在蛋白两侧，gst纯化后使用甲酸溴化氰切割gst标签，混合液冻干后，希望使用his再次纯化，可是纯化效果不佳，估计是切割过程中ph影响his标签结合柱子。请问各位蛋白溶液ph调节一般如何进行？
15 个回答
一支肾上腺素
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如果提高溶液的PH值，那么就要在溶液中加入大于这个PH的溶液；如果要降低溶液的PH值，那么可以加入小于这个溶液PH的溶液。在调节溶液PH的过程中，应该随时监测溶液PH的变化。
红格子一号
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试用透析或者超滤进行buffer置换，用常见缓冲液比如pbs
jey1235
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兄弟，his tag 的挂ni beads ph低于6效果就大打折扣了。切记切记。
其次调整蛋白ph当然是用来透析啊，怎么可以直接调呢！选好buffer 介质 mes hepes tris 很多的。一定不能直接调整。
ZZDX-YILILI
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1.纯化效果不佳我不知道是纯化下来的浓度低还是咋的哈。首先你的蛋白质带着标签，我建议如果标签相对较小不影响蛋白质功能的话，不去过多去除，因为去除的过程中有可能反而会影响本身的蛋白质活性。
2.his利用镍住进行纯化，如果能确定正常结合上去的话，一般采样合适的洗脱液是能正常洗脱下来的。
dxy_bq4uxnd
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我们在调节蛋白溶液ph时一般会用tirs-hcl这一种缓冲液进行调节，首先配制所需ph的tris-hcl溶液，使用该溶液调节蛋白溶液ph
verbalkint
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如果浓度不低，可以直接缓慢的一边rotate一边加hepes或者tris 8.0调ph，如果溶液体积很重要或者浓度很低，可用透析
dxy_h7vcp8v3
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GST标签切割可以选择 GST切割酶进行标签的切除；其次，关于纯化好的蛋白再次挂柱，建议先用GST标签吧目的蛋白纯化得到。然后，切除GST标签。然后得到的蛋白溶液，用小载量的重力纯化柱进行his标签的挂柱。然后，采用含有咪唑的洗脱buffer洗脱目的蛋白。。如果，非要调节蛋白溶液buffer 建议使用缓冲能力强的Tris盐酸体系进行蛋白纯化。
dxy_pni5ki46
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调节ph实际上就是置换缓冲液，用脱盐柱或者透析袋都可以，另外在得到最终纯化产品前其实最好尽量避免冻干，冻干复溶的过程对蛋白影响还蛮大的
dxy_4uyyu09r
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你要测下ph值，如果酸了加点氢氧化钠中和一下再试试效果！也可以直接用ph缓冲液调解ph到合适的数值
Guoood
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首先需要确定his标签蛋白确实能够挂柱，其次洗脱不佳的话可以适当增加咪唑浓度或降低pH加强洗脱条件，用强酸去洗脱，洗脱液记得加碱中和。
飞天幻雪
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可以调整一下纯化步骤先用his，再用gst。gst上一步的切割后ph值确实会影响下一步的纯化结合，建议加点缓冲液，同时尽可能稀释一下浓度再纯化，同时也要注意是不是柱子本身出现了问题影响的。
z流沙z
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可以设置梯度ph，逐渐进行，可能比较稳定
bamboopiggy
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这个我不专业，仅供参考：gst纯化和his纯化本身好像ph就不一样。你gst纯化完以后，最好先做个预实验，可能需要设ph的梯度，看his的结合程度，然后再做下一步。
dxy_w4oj7yoe
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可以浓缩置换buffer，或者用一个ph高一点的高浓度缓冲液加到蛋白溶液里，边加边搅拌，缓慢加，比如说100mM Tris8.5之类的，肯定不能突然让蛋白溶液ph变化太大，否则蛋白很容易沉
vae1476
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建议不要用强酸强碱来调节，最好用稀酸稀碱，防止对蛋白性质产生影响
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