WB转膜10KD的蛋白电转条件？
丁香实验
我用的0.22um的膜，蛋白分子10KD，之前试过恒流240mA，60min没有条带？请问跑过小分子WB的前辈，我应该用什么电转条件呢？
18 个回答
医往情深丁香园
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我们湿转时转膜液中一般都是不加SDS的,而甲醇是必须加的,量通常在100-200ml,我们在做12KDa时甲醇150ml,条带ok,转膜液中改加甲醇试试吧。
verbalkint
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分子量太小，60min可能转过了（穿过膜到了滤纸那层）这么小的蛋白我个人会用200mA 45min
JCorona
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你只说了恒流，没说时间是多长，无法排除时长不合适的原因哦。而且没有条带也不一定是电转条件不合适，你的样品是否真的含有你的目的蛋白？目的蛋白是否电泳到合适的位置了？这些都要考虑。电转条件可以参考别人的文献，小分子的话建议低电压小电流先试一试，时间参考别人的方法自己摸索几遍。
ZZDX-YILILI
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你这个蛋白分子量的确挺小的，我建议你先试试半个小时，看看能否转完全，如果转不完全加到45试试。1小时时间太长了肯定转过了
内科小护士
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建 议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜时间一般是 150 分钟，80 伏恒压。
dxy_pggo2lp2
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0.45PVDF膜，冰浴湿转，100V或120V，45min
dxy_h7vcp8v3
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采用15%的蛋白胶，或者专门跑小蛋白的蛋白胶，防止蛋白过小跑出胶条，WB没有条带。其次，小蛋白转膜的时候可以100v恒压转30分钟，不要转太长时间。
dxy_4uyyu09r
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电流和时间都可以调低一一些。电泳的时候电压低一些，胶的浓度厚一些
兔子爱吃鱼
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最近也在做类似的实验，我的分子量是15，之前用0.45的膜，200mA，1H，感觉有点转过了，用0.2的膜很难转过去，大概要用到360mA，1.5h，你可以试试
dxy_pni5ki46
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我之前做一个13kda的，是用90v恒压半小时，转膜液不能加sds。
z流沙z
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200mA转膜半小时就够了，转太久可以过去了
一支肾上腺素
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转膜条件（湿转）恒压70V，2h以及恒流200mA，1h均可，针对你的条件可尝试100V，1h,内参肯定能转上，而目的蛋白也不会这么容易转过，如果还是没有，就该考虑转膜以外的因素了，其中很关键的一个就是你的一抗。
dxy_bq4uxnd
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对于小蛋白，建议加大分离胶浓度12%与15%都是可以的，膜的话用nc膜与pvdf膜都行，转膜400ma 100v 90min。
小白野蛮成长
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恒压100v 湿转20min左右
飞天幻雪
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我以前做过泛素，比你这个稍微大一点，转膜的电压还可以再降低，膜用的没问题。如果担心转过了，可以加两张膜，另外一定不要加sds
Guoood
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小分子蛋白建议用较高浓度的胶，比如15-20%，或者用梯度胶，可以较好的将条带分开，转膜条件没有太大问题。
bamboopiggy
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你看到你的marker了么？如果marker也没有过去，我感觉你的转膜时间可以改为1小时10min，400mA，或者是300mA，2h，首先看临近的marker过去没有。
vae1476
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60分钟太长了，缩短一半差不多，越是分子量小的，转膜时间要越短，另外跑胶12%的胶比较好
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