目的蛋白和内参的条带形状反方向弯曲的原因？
丁香实验
图中上面是目的蛋白（51kDa），下面是内参蛋白（42kDa），是同一块胶，同一张膜上跑出来的，弯曲方向却完全相反，这是为什么呢？要如何调整使条带平直？
用的是生工的15%预制胶，电泳参数：130V 70min，电转：湿转 110V 90min 
19 个回答
lzy必有我师
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如果蛋白样品足够的话还是建议跑两块胶，分别看内参和蛋白；如果一定要在同一张膜上面看的话，可以先看目标蛋白的表达，再用stripping buffer孵育去除一抗，再重新封闭，按照一样的步骤看内参，但这种方法比较不好掌控，stripping不到位，原本的抗体会有残留，stripping过度的话，再看内参的信号会很差
医往情深丁香园
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板子底部有气泡： 随着电泳，缓冲液的温度上升，气泡变大，将胶与缓冲液分离，导致电场不均匀。
verbalkint
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一个可能是胶不太好或者跑的太快；另一个蛋白样品要多煮一会
内科小护士
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原因很多。1.目的蛋白是否表达量很低，因为内参表达是很高的。2.抗体的选择是否有问题，有没有阳性对照？？
dxy_pggo2lp2
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我觉得不是你跑胶的问题，可能是转膜时三明治太厚的原因，建议减少滤纸量。而且要把膜放在夹子中间，不然膜上电流条件会不一样。
dxy_h9snbtq9
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考虑可能是电压过大了，建议改一下电压
dxy_h7vcp8v3
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可以采用12%的蛋白胶，其中浓缩胶稍微制备长一点，跑胶的时候先80v在120v 也可以一直80v慢慢跑。其次，转膜的时候确保压紧没有气泡，转膜电压也不宜过大，建议100v 最后，检查自己蛋白样品是只吸到上清没有吸到沉淀。。建议增大样品量，上样时别吸到沉淀。
dxy_4uyyu09r
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不知道你的marker是哪个方向的弯曲，正常15%的胶不容易弯曲的，还有电泳的仪器是不是出现了问题。不过电泳液也需要看看ph值
ZZDX-YILILI
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1.首先你这种情况，很大原因是样本在浓缩胶的时候没有压成一条直线就开始变换电压。导致最终条带显示的是上样时样本的样子。
2.电泳缓冲液是否配置正确，理论上即使样本木有压太齐，样本在分离胶过程中也应该能沉降下来的。
dxy_pni5ki46
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可能是15%的胶浓度有点大吧，感觉像是电泳速度不一致，可能和蛋白性质或者没充分变性有关，换低浓度试一下，或者有条件直接用梯度胶做一下
jey1235
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一般出现笑脸很多都是buffer体系不均匀导致电流在槽内不是均匀的直接让两端样品出现拖尾。
你这种上下反的呢，我以前倒是见过，主要是样品的粘度比较高，一些脂质和糖会干扰样品在泳道迁移出现不一致。具体要在制样前告诉离心一下，然后使用新鲜的loading buffer
一支肾上腺素
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板子没洗干净，胶用国产试剂配的？是不是有杂质？10%-12%的胶完全可以做小分子量的，跑的时候不要把胶跑到底，跑到分离胶的一半就可以转膜了
z流沙z
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这膜有没有放反？没有的话考虑电压太大了，可以先80v跑40min，然后再120v
飞天幻雪
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明显电泳速度太快了，建议降低电压或者改变温度，放在冰上电泳
bamboopiggy
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把电泳参数改为100v甚至更低，跑胶时间根据marker的位置来判断，条带会好看，月时电流大了，条带越容易变形。
vae1476
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42 51kd分子量都比较适中，10%的胶其实就够了，15%会把下面分的太开了
小白野蛮成长
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可能电压问题 把电压调下去试试
dxy_bq4uxnd
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是电压太大的问题吧，我们在跑电泳的时候一般都会80v 25min 120v 80min 全程300ma。
Guoood
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考虑跟电泳有关，外槽电泳液量要够，内槽保证没有漏液。上面条带弯曲是因为开始电压过高了，可以先80V跑开后再升到130V。
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