sumo蛋白酶切不开带sumo标签的蛋白的原因？
丁香实验
带有His标签和sumo标签的蛋白，用sumo酶30度酶切2-3小时不能切开，问题会出在哪？怎么解决？
24 个回答
dxy_d4xj2yg7
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1. SUMO酶活性不佳，加对照蛋白验证酶活性有没有问题。
2. 有可能是蛋白结构问题，标签的结构可能不正确，酶无法识别标签。可以考虑换个其他标签，比如EK,3C等。
是小杨同学
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我觉得可能是酶的时间有点长了，然后酶失活了，或者可以检查一下温度的问题
lzy必有我师
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1，注意切割酶的活性；2，注意切割酶的切割效率，是否加了足够的酶；3，设置阳性对照，换别的以前切割过的his或者sumo标签蛋白作为阳性对照，检查是否酶或者自己蛋白的问题。4，增加切割时间，同时，检查切割酶的切割buffer是否正确。
dxyhsx123
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确认两个问题，一酶是不是有活性，二是不是有对应的标签。确认这两个问题后，应该就解决了。
一支肾上腺素
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酶是否过期，还有一个温度是否适宜，掌握好这两点，应该是可以切开的。
医往情深丁香园
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这些酶切位点特异性都比较高，但切割效率各不同，除了SUMO蛋白酶之外，其它常用蛋白酶切除标签后都会残留几个氨基酸残基。
zxb597
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要查看试剂盒是否过期，或者盐浓度问题。
JCorona
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1.纯化后的蛋白鉴定了吗？确定成功表达出目的蛋白了？目的蛋白确定带有稳定的标签？2.酶保存不当或者过期，结果就是酶失活了
dxy_h7vcp8v3
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其一，检查切割酶是否有活性；其二，检查切割酶的切割效率，是否加了足够的酶；其三，设置阳性对照，换别的以前切割过的his或者sumo标签蛋白作为阳性对照，检查是否酶或者自己蛋白的问题。其四，增加切割时间，同时，检查切割酶的切割buffer是否正确。
dxy_w4oj7yoe
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首先要排除蛋白酶的活性问题，然后可以增加酶切时间，另外buffer盐浓度也会影响酶切效率，可以尝试提高盐浓度，如果都不行可能是表达的问题，目的蛋白把sumo标签包埋在内部蛋白酶接触不到了，这种可以在sumo和蛋白之间加一小段linker，当然完全可以再换几种tag试一试
于小闹0808
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如果是一直都切不开，也是正常的，有些蛋白确定很难切开，可能是由于三级空间结构的问题，也有可能是切开效率不高。如果是切开效率不高，那么你需要优化一系列参数，比如说温度、酶量、酶切时间、酶活是否足够、另外自身样品缓冲液环境、也要考虑是否含有蛋白酶等等
ZZDX-YILILI
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1.酶切试剂盒是否在有效期内，之前使用这个试剂盒是否正常。确定试剂盒有效。检查酶切反应体系。
2.SUMO差不多30℃一小时就能切开。
dxy_pni5ki46
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不知道酶切时候酶和底物的比例怎么样，酶切的缓冲液ph之类的条件如何。酶切切不下来一般是条件不适合或者活性不够，试试增加酶量，适当延长时间。或者4度过夜试试。
jey1235
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确定了酶切位点没问题？site前后需要加短linker能有利于暴露位点。在我记忆中，Ulp1的酶切效率非常高。如果site没问题，是不是切错蛋白或者Ulp1已经失效了？
做个WB看看，确认一下目标蛋白带了tag
z流沙z
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首先考虑酶有没有过期，然后是快切酶还是慢切酶
dxy_qkedgrg7
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正常来说这个温度和时间应该是可以切开的，如果酶切开很有可能是酶失活了，活性降低了，可以延长时间会换个新的试试
dxy_bq4uxnd
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有没有可能是酶使用过程不规范，效价降低，可以重新买一管酶，或者延长作用时间。
dxy_4uyyu09r
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确定载体能正常表达吗？如果蛋白正常的情况下那就是酶的问题，换个新的试试，或者找以前好用的蛋白做对照。
飞天幻雪
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首先要确保蛋白没问题，是否表达正常和带标签。其次你这个酶的活性还有待确定，另外酶切的时候保证体系里面的ph和盐粒子等因素都会影响切割
Guoood
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确保酶是工作的，cut buffer也很关键，避免反复冻融，其他原因需要考虑片段酶切位点附近保护碱基是否足够。
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