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问
跑胶跑成斜线,是胶的问题还是电流的问题
wuli猫宁
胶带跑偏的调整工作,应在空载运转时进行。一般从机头卸载滚筒开始,沿着胶带运行方向,先调整回空段,后调整承载段。调整时,应在一侧进行调整,切勿两侧同时调整,并且一次调整的幅度不能过大,要根据胶带运转情况适当调整。
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问
ELISA中用到的试剂都是哪些?
lzy必有我师
1、包被缓冲液:0.05mol/L,PH9.6碳酸盐缓冲液(CBS) Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 加去离子水水至900ml,调pH值到9.6,定容到1000ml。121℃,0.1MPa高压灭菌20min后,室温贮藏。 2、磷酸盐缓冲溶液(1×PBS):0.01 mol/L、pH7.4 NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g KCl 0.2g Na2HPO4·12H2O
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问
吸附抗体的选择,非稀释,稀释?
dxywode
选择抗体应先了解其反应谱和适用条件(包括适用切片、稀释度及温育时间等)。使用一种新抗体时,必须首先摸索出最佳浓度,所谓最佳浓度就是能获得最佳特异反应所需抗原的最低浓度。或者按照有关说明书的提示。二、稀释1.一般用0.01MPBS,PH值7.2;2.或用0.05MTBS,PH值7.6;
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问
为什么细胞培养需要用到血清?
bqejjh123
加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境,此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。
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问
做wb实验每次只加一种一抗,可以同时加两种或者多种一抗的吗?
bqejjh123
最好不要,根据抗体而定,只是基础成分一般都是TBST或PBST。抗体说明书会写到底加BSA还是NF-MILK。有钱还可以买专用稀释液,特异性进一步降低,成分可能包括人工合成的肽、明胶、酪蛋白、多糖类等。
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问
二抗敷完了发现敷错了,怎嘛办?
bqejjh123
如果敷错了,可以洗一下再敷,不然二抗会污染
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问
大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性有没有影响? 如果抗体很快(1-2 周)会使用,推荐在如何保存?
府宅
试剂盒中的抗体和酶在4度可以放半年
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问
流式细胞术最多能用几种抗体去筛选t细胞
府宅
淋巴细胞4.CD3 + T淋巴细胞5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞
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问
目前有耗尽型T细胞的抗体吗?
dxy_gwrp7ndq
免疫T细胞彻底耗竭与DNA甲基化过程有关
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问
大家进行细胞给药时,加血清吗?一般正常条件是不是给药都加血清啊?
dxy_gwrp7ndq
还是要看你的细胞种类的,有些细胞生长比较好,并且药物作用时间短可以不加血清的。一般我都是加含5%的血清的。肯定不能等细胞长满板子才加
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问
关于免疫荧光细胞效率的问题
府宅
内源性原因就是你的细胞长的太密了。外源性可能是你转染造成的。还有可能更你做一抗二抗有关。
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问
免疫荧光染色背景过亮该如何改进?
府宅
封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合,减少背景染色。如果背景太强,可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间
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问
关于chip-seq或者cut-tag的问题
府宅
ChIP-seq可以不设置生物学重复;如果设置生物学重复,要尽可能增加重复个数。
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问
免疫共沉淀检测到蛋白信号弱的原因是什么呢?
府宅
抗体浓度太低,应对措施:调整抗体浓度,必要时设立浓度梯度,摸索最佳浓度;
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问
免疫共沉淀的相关问题
dxywode
在细胞裂完离心之后、加入抗体ip之前吸出来的细胞裂解液。可以在wb曝光时显示目的条带的位置以及比较不同泳道之间用于IP反应的细胞蛋白量。
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问
做WB转膜时发现marker没转上,但是全程做完扫膜以后内参是有的,目的淡到约等于无是怎么回事儿?
dxywode
marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时,如果用的是带有CCD相机的仪器读取结果,目的条带读取化学发光信号,而marker要用明场单独拍摄;如果是采用压片,显影定影,则需要提前标记。
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问
做WB的时候加入抗体后条带出不来,要怎么快速判断出来是用的抗体有问题还是样本有问题?
dxy_gwrp7ndq
降低抗体浓度,增加二抗对照(不加一抗)。 抗体未经纯化 使用亲和纯化的抗体,减少非特异性条带。
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问
最近跟着老师做实验,想咨询一下,做双向免疫扩散时用的合成抗原OVA-**的浓度是多少合适?如何控制才能得到最优结果?
dxywode
1)血清学诊断 2)免疫化学分析:沉淀线位置主要与抗原、抗体两者浓度比例有关,沉淀线靠近抗原空,提示抗体含量高;靠近抗体空,提示抗原含量多。分子量大扩散慢,扩散圈小,形成的沉淀线弯向分子量大的一边。如二者分子量相对,则形成直线。 3)抗体效价滴定:固定抗原浓度,稀释抗体;或抗原抗体双方做不同稀释医学|教育网,经自由扩散,一出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。 4)分析抗原性质 5)鉴定抗原或
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问
表面效应如何降到最低
府宅
可以颗粒直径的变小而降低表面效应
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问
血清与血浆该如何选择 如何制备高质量样本
dxy_gwrp7ndq
可以低温:4℃;低速:人血~2000rpm、小鼠~1000rpm、大鼠~2500rpm
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