有目的蛋白却没有actin和tublin的原因？
丁香实验
实验组收细胞，跑WB，内参用的actin和tublin发现没有条带，有条带的特别浅，但是目的蛋白有，并且GAPDH有，上样之前做过BCA定量，调整浓度后上的样，这会是什么原因呢？ 
17 个回答
隔壁家的小夜猫子
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gapdh这不是挺好的么，你那个基因可能影响贝塔actin表达了，用gap，不放心再用个别的内参试试。
JCorona
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对照组有条带，那么基本可以排除操作问题。实验组做了什么处理？是否会影响内参蛋白的表达？或者是曝光时间不合适？是否实验组的目的蛋白浓度过高，曝光程序自动曝光的时间比较短，相对地显得内参蛋白条带不明显。
红格子一号
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建议检查内参抗体，一抗或者2抗可能出问题
dxy_h7vcp8v3
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首先检查BCA测定实验组没有条带的蛋白浓度是否测得准确，是否没有测量准确，是否上样前稀释过度，导致蛋白浓度很低，因为跑胶没有检测到或者很微弱。建议，可以比这次实验增大蛋白浓度，再次跑胶检测是否有条带。。其次，检查是否转膜时有气泡，气泡影响了转膜效率，导致有条带与无条带，建议转膜时压紧，注意赶气泡。
ZZDX-YILILI
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1.这个很可能是actin和tublin的一抗有问题，确定下二者的一抗是否合适。
2.确定下一抗二抗是否相互匹配，我怀疑你有可能用的二抗没办法识别一抗，所以最终没有显示出来。
dxy_bq4uxnd
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我们也出现过几种不同的内参蛋白结果不一致的情况，遇到这种情况，要相信自己BCA检测的结果，选择一个相对整齐的内参，用于后续实验。
jey1235
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一张膜，同样抗体有的泳道有信号有的泳道没信号，基本排除所有实验操作问题。
问题就在样品上。你的样品就是没actin
要问为啥，就要看你怎么treatment的，是不是有不可预期的副作用。或者改变了actin的表达量，等等。建议换细胞
dxy_pni5ki46
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有可能是经过处理后蛋白表达量变化，毕竟是根据总蛋白量上样，如果其它蛋白增加了那么相应的actin的比例减少也是有可能的，还有可能是你的实验处理影响了beta actin的表达，再或者是处理影响了gapdh的表达。现在有的文章接受总蛋白定量的就是因为内参蛋白表达量其实也是会变化的
dxy_pggo2lp2
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有些情况下是这样的，我们组也是actin跑不出来，GAPDH可以。如果你不是专门研究actin的就直接用GAPDH吧，专心自己的方向。
dxy_4uyyu09r
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你这个浓度测量的应该还可以，gapdh还可以，你这个是怎么处理的？是不是影响了其他内参的表达？
小白野蛮成长
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再多跑几次 和气泡，夹子没夹紧有关系
z流沙z
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看条带抗体感觉没有问题，那可能是转膜有问题
飞天幻雪
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这很正常啊，你加的药物影响了actin的表达，而且你这个未加药的信号那么强，抗体肯定没问题，建议后续用gapdh做内参就行了。
Guoood
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目的蛋白有条带，内参GAPDH也有条带，说明蛋白提取应该没有问题的。排除下actin和tubin 一抗是否工作，是否用错相应二抗，可以用其他同学可以孵出该条带的抗体试试。
bamboopiggy
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你仔细研究一下内参看看，不是所有的内参都合适的，如糖代谢的不适合用gapdh做内参，actin不适合在纤维话的样品里做内参。有一个可以用的就可以
verbalkint
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那就用gapdh，内参有一个准的就行，有的细胞就是不适合actin或者tubulin作为内参
vae1476
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看到你bactin 也是有的只是趋势不对，管家蛋白有时候在不同组织中，并不一定稳定表达，最好查下文献选择最适合的内参
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