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实验问答

31,777,865 科研人在看

问做COIP实验，互作的两个蛋白在目标位置有条带，但是阴性对照（NC）在相同蛋白分子量的位置也出现了浅条带，是什么原因？怎么改善？

小暮

阴性不应该有条带，有条带就是有结合，这个说明抗体有非特异结合的可能：1.抗体特异性不够，如果反复多次阴性对照出现条带考虑，更换抗体。2.上样错误，仅表现一次阴性对照阳性，重复实验就行

3 回答734 围观

问免疫荧光中DAPI 信号过强甚至看不清细胞核轮廓和核仁是什么情况？

dxywode

1.组织切片太厚：这种情况下可以选择将组织切片变薄试试。2.封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

3 回答4841 围观

问柱层析纯化抗体问题解答

府宅

色谱柱填装紧与否对分离效果很有影响，若松紧不均，特别是有断层时，影响流速zhi和色带的均匀，但如果装时过分敲击，色谱柱填装过紧，又使流速太慢。影响层析柱整体渗透速度分布不均，致使色素带不是整齐的环状色素带，进而增长分离各色素的时间，应在装填层析柱前用适量的丙酮润洗一下，后在装入氧化铝时应边加边敲打层析柱使氧化铝殷实，然后用真空抽滤方法，用乙醚进行抽滤至无气泡为止。

2 回答1373 围观

问重复性较差，做了两个复孔值相差太大，是什么原因？

dxywode

1、样品数量多少不一，加样时间有长有短；所以重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近。2、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致；重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性。3、加样量不一致；样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。

3 回答675 围观

问花板实验终止后，整板结果呈现均一的黄色或淡黄色，或阴阳性对照、质控正常，阴性标本OD值过高。是什么原因？

dxywode

: ①整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成。②酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象。③孵育温度过高或孵育时间过长。④未按要求洗板，用自来水或其他公司洗液洗板，特别是洗液时每孔未注满洗液，易造成花板黄板现象。⑤阴阳性对照、质控正常，阴性标本OD 值过高的情况称为花板，一般是由于标本的收集、处理和保存方法不当，洗板不切底、显色时间延长造成。

1 回答618 围观

问染色质为什么要片段化，片段化长度是多少

府宅

一般片段化的大小在200-1000bp，一般300-600bp均能获得较好的ChIP结果。如果小于200bp的话，蛋白的结合位点很有可能被打断，原因是由于每个核小体结合DNA的序列长度为175bp，加上不同核小体间的linker DNA序列，这样每个核小体结合DNA的最小序列大概在200bp左右，如果片段长度大于1000bp，您将会分离获得包含目标序列的DNA，但所要研究的蛋白可能会离您目标序列有

2 回答1233 围观

问流式的电压如何调，怎么样是个标准

peaceful13

先用空白细胞，让细胞压在左下角的位置，然后可以用全染管样本，看一下所有检测通道电压是否在检测范围，最终上单染管确定最终电压值

3 回答4039 围观

问红斑狼疮的药物治疗？

府宅

如果仅有关节或者皮肤粘膜的这种受累比较轻的红斑狼疮，我们可以在密切监测病情，不选择激素，而选择非载体药、抗疟疾药，或者沙利度胺，这些药也能让病情得到有效的控制。

3 回答652 围观

问染色细胞核不清晰是什么原因呢？

师医生说

在免疫组化染色中多使用HE染色中经常出现有细胞核的染色不清晰，1，首先要考虑是否有固定不及时及固定不完全的情况，2，细胞核着色主要是苏木素，其主要的作用要看下是否有苏木素存在结晶以及环境温度过低，3，有使用过久的苏木素染液。4，无水乙醇以及透明剂没有很好的把握时间

5 回答1394 围观

问免疫荧光背景太强怎么解决

Kimser

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

4 回答4922 围观

问石蜡切片如何保持固定

师医生说

病理组织切片必须经过固定才能保证后续一系列的制作过程组织标本要在24小时内尽早的固定，最好是立即固定，越快越好，另外，固定液的选择要使用10%的中性缓冲福尔马林液。固定液的量必须大于标本体积的4倍以上固定的温度要保证，至少在24摄氏度及以上的环境中操作。在操作过程中，要保证酒精脱水和进水的浓度

4 回答1982 围观

问环状沉淀试验中，为何下层加特异性抗血清，上层加抗原？

小暮

从定义上看，因抗血清抗体浓度高，比重较抗原大，所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时，在两液交界处呈现白色环状沉淀则为阳性反应。相应抗体只会与相应抗原结合，而先加抗原，抗原会与其他物质结合。这样充分特异性结合

3 回答812 围观

问用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白，两者操作过程有哪些不同？

小暮

原理都是一样的，就是固定方式不一样，细胞固定多用甲醛，组织切片固定多用多聚甲醛

2 回答883 围观

问白板显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色是什么原因？

师医生说

在整个反应过程中有操作步骤错误，同时要检查是否试剂在有效期内，另外，要看显色液的AB液是否没有保存在避光环境中有失效现象。同时，要观察洗板过程中是否有清洗中高浓度的清洗液而导致包被的底物浓度不够，也不排除有其他的洗板过程中的消毒液影响

4 回答585 围观

问Elisa实验显示不明显问题

peaceful13

是所有孔显色都不明显？标曲如果也不显色，那应该是整个实验体系是有问题的，需要去深究一下原因，如果标曲显色是正常的，而样本显色比较低，一般就是样本含量的问题，如果确实是因为含量低的原因，那么需要优化一下样本的处理或者对样本蛋白进行提取过纯化

4 回答605 围观

问在用流式分析TME中各种T淋巴细胞群的变化时，CD3这群细胞没办法从CD45中明显圈门出来，导致后面分析不够准确，请问有什么办法

Kimser

使用特异的单克隆抗体，进行多色分析，同时分析淋巴细胞上多种抗原的表达

3 回答584 围观

问流式实验的时候FCblocker 和FVD活性染料哪一个应该先放。

peaceful13

先染FVD死活，因为这个是染料会跟蛋白或者抗体结合，所以需要在无蛋白的缓冲液进行染色，Fcblocker主要成份刚好就是蛋白或者抗体，所以需要先染死活

2 回答1755 围观

问石蜡切片染色要到什么程度呢？虽然是半定量的一个方法，太深太浅都对数据有影响。

桐轩456

我觉得这个程度只能是自己去分辨，每一步都必须准确操作，因为染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响，再说不同染色液染色后处理也不一样，所以一般只能根据镜下观察所见予以调整，然后再根据实验室的实际情况灵活掌握。

3 回答692 围观

问通过染色进行的细胞分选一直不太成功请问注意事项？

Kimser

样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些，因为在分选过程中，血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度，并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。

4 回答1282 围观

问我想设计一个实验研究的是姜黄素对小鼠作用，主要和一些介素有关，如小鼠介素2、IL-1B、IL-12、肿瘤坏死因子B。哪个最紧密？

peaceful13

你应该先搜索文献，这些因子主要跟哪些细胞相关，采取什么样的形式进行检测，需要有目标样本的确定性，再设计相关实验方法

3 回答2082 围观

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