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问
保存细胞的细胞冻存管在使用之前需要灭菌吗?
赵小叶
冻存管没有开封之前应该都是无菌的哦 如果盖子开了就别用了吧 不能高压灭菌重复使用
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问
关于-80度冻存组织的核蛋白提取的问题
小布丁瑶瑶
可以的,结果可能会不同,减少-80度的时间,结果应该会更相近一些
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问
提取的组蛋白Histone3怎么定量?
dxy_h7vcp8v3
首先检测内参的抗体和你自己目的蛋白是不一样的,从内参和目的蛋白WB来看,说明你自己的蛋白胶及转膜体系都没有问题。就应该在不同的地方找原因,其一检查目的蛋白的抗体是否过期或者长杂菌 ;其二,检查目的蛋白提取所用buffer是否调节至中性PH值,是否其中缓冲液让蛋白质变性导致没有条带 ;其三建议检查下,自己第一次提出来呢过程中的关键试剂,是否在后边提取中做了更换,检查更换的试剂是否正确。
13 回答
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问
贴壁细胞蛋白提取相关问题
ZZDX-YILILI
1.首先你的这个方法从哪得到的我不是很清楚哈,根据我的经验,你这个4℃一小时时间相对就挺长的了,有可能会造成蛋白质降解。2.细胞系的话,一般冰上或者4℃裂解30分钟就足够了。3.裂解液的话,我一般用的是购买的RIPA,你这个tritonX裂解能力对细胞系应该太强了,尽量换下相对温和的裂解液。
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问
蛋白质在透析过程中有大量沉淀的原因?
是小杨同学
有可能是因为PH值,温度等引起的沉淀,也有可能是蛋白本身就不太稳定容易沉淀,可以超声或梯度透析试试看
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问
His tag蛋白镊柱纯化速度太慢是什么原因?
红格子一号
样本离心不彻底细胞碎片太多了导致堵了柱子
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问
纯化方法相关问题
一支肾上腺素
一定要记住56℃30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。如果温度过高,时间过久或摇晃不均匀都会导致沉淀物的增多。
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问
CO-IP之后的蛋白质和磁珠分离的方法相关问题
小布丁瑶瑶
0.5-4微克/mg 总蛋白即可 一般抗体浓度都很高 1:200-1:500左右
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问
input control是什么意思?
医往情深丁香园
就是裂解的蛋白原液,如果目的蛋白表达量正常,这个是很容易曝光出来的。
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问
转膜后蛋白异常的原因?
是小杨同学
我觉得可能是电压有点高,导致蛋白质降解了,然后可以换个电转仪器试试看
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问
GSTpulldown诱饵蛋白不结合柱子怎么办?
小布丁瑶瑶
可能是标签包起来了,可以尝试变性纯化
28 回答
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问
内参GADPH出现弥散,并且有两条条带是为什么?
是小杨同学
我觉得可能是你的蛋白降解了,然后出现了两条带,最好用新鲜的蛋白来跑胶呢
29 回答
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问
敷完二抗后可以隔夜曝光吗?有影响吗?
医往情深丁香园
可以隔夜曝光,一抗可以过夜敷隔日曝光都可以,二抗如果来不及当天曝光,不如就放在一抗里。
30 回答
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问
WB转膜SIRT1蛋白一直失败的原因?
医往情深丁香园
说明你抗体有问题或者目的蛋白表达量有问题。如果他的也转不过去。
24 回答
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问
wb一抗和二抗去除液的原理是什么?
小布丁瑶瑶
可以试着用一下膜再生液,等洗好后,再曝光看下还有没有条带,没有就可以孵育新抗体了
31 回答
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问
分泌性蛋白浓缩后做WB,如何选择内参?
我也是锦鲤ye
内参的选择需要考虑实际的试验环境。
32 回答
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问
加入loading buffer煮沸后整个变红?
小布丁瑶瑶
可能是蛋白质酸性太强了,可以检测一下样品或ph值
31 回答
2875 围观
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问
条带出现斑点,内参却很整齐的原因?
红格子一号
封闭可能出了问题或者牛奶没混匀,建议用抗体稀释液
18 回答
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问
测糖基化修饰水平出现两个条带的原因
医往情深丁香园
最好再重复一次实验看看,另外,别人做糖基化跑全膜,主要也是想说明多个糖基化的位点,所以可能出现条带的位置改变,在整张膜上,都可能出条带。
18 回答
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问
WB转膜中间marker颜色很浅的原因?
我也是锦鲤ye
很可能是转膜没转好,转过了;也可能是没配好。
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