提取的组蛋白Histone3怎么定量？

13 个回答

dxy_h7vcp8v3

2022-01-20

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首先检测内参的抗体和你自己目的蛋白是不一样的，从内参和目的蛋白WB来看，说明你自己的蛋白胶及转膜体系都没有问题。就应该在不同的地方找原因，其一检查目的蛋白的抗体是否过期或者长杂菌；其二，检查目的蛋白提取所用buffer是否调节至中性PH值，是否其中缓冲液让蛋白质变性导致没有条带；其三建议检查下，自己第一次提出来呢过程中的关键试剂，是否在后边提取中做了更换，检查更换的试剂是否正确。

jey1235

2022-01-20

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类似的问题其实存在分析条件不足。建议所有的有问题的WB全部不要裁膜，然后跑一张考马斯亮蓝的SDS-PAGE。单看这个膜，严重怀疑样品年度过大，没有做好消化，组织消化匀浆一定要彻底。 H3的WB有个技巧，务必要将核裂解充分，不然很容易出现条带拖尾。然后就是务必要将DNA进行消化处理，否则H3很难显影。切记切记。

ZZDX-YILILI

2022-01-20

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1.内参没问题排除实验过程你的操作应该没有问题。目的蛋白出不来首先考虑一抗是否合适。 2.提取的蛋白质是否按照之前那样提取的，首先确定你的蛋白样本没有问题，可以让别人试试。 3.还有其他分子出不来就考虑一是否这个分子表达量低，按照之前的上样量无法检测到，二就是抗体确定是否没问题。

dxy_bq4uxnd

2022-01-20

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之前都没问题，现在有问题，说明操作是没有问题，内参蛋白没有问题，目的蛋白不显示，可以考虑是否是蛋白抑制剂选择有问题，建议根据目的蛋白选择合适抑制剂后再试试。

dxy_pni5ki46

2022-01-20

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看起来目的带有点杂，似乎是好几条。有可能是蛋白降解，或者是有修饰，所以有不同大小的带

dxy_4uyyu09r

2022-01-20

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提的过程中一定要加蛋白酶抑制剂，在冰上操作，时间尽可能保证裂解的情况下不要太长，基本就没什么问题。保存建议负八十

dxy_w4oj7yoe

2022-01-20

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如果你想知道提蛋白过程有没有问题的话最好给大家简单说一下你的整个纯化流程，否则我们也很难判断。一般我们定量组蛋白的话就是跑胶定量（量比较大就考染），如果要做wb就先定总蛋白，跑一下wb试试，再细致定量。看你的wb感觉背景很高而且有点拖带，样品可以再多煮一煮，上样前离心取上清，先把wb跑好确定你的目的蛋白是提出来的少了还是其他什么质量问题再说