WB转膜中间marker颜色很浅的原因？
丁香实验
如下图，是什么原因以及如何处理
200毫安 一个半小时 赛默飞的marker，大家有遇到过同样的情况吗？
42 个回答
我也是锦鲤ye
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很可能是转膜没转好，转过了；也可能是没配好。
dxyhsx123
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如果只是中间的颜色较浅，并且重复验证过，主要原因可能是，胶是否混匀，电压是否稳定，以及Mark是不是过期等。
dxy_pggo2lp2
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可能是夹子出问题，不够紧，中间有空隙。
dxy_9kptsiw
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把海绵裁剪适合大小，过大会影响转膜效率
小猴子爱学医
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转膜的时候三明治夹子没夹紧吧！换个新的滤纸和海绵垫再试试。
dxy_rlratyf3
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marker底部是有颜色且清晰的，所以应该不是marker的问题，湿转中凝胶和膜需要紧紧夹在海绵和滤纸之间，夹不紧可能出现没转上也就是条带确实不清的情况，条带的形状和电泳条件都没什么问题，应该是因为没夹紧。
于小闹0808
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可能是由于电压或者温度的问题，导致转膜做的不是很好，建议重新做一下转膜。
此用户已注销
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因为操作的时候会习惯性的压实两边，中间会没有两边严实，会出现转膜不均匀。
dxy_o38ns7o8
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1，转膜时间太短，电压不够大，或者转膜过程中温度过高导致转膜失败
2，marker不太行，marker上样少
dxy_w4oj7yoe
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大概率是转膜操作问题 胶与膜之间有空隙 或者三明治没有平整夹好 或者是转膜温度太高（尝试低电流在冷室或在冰水浴中转膜） 如果上面的都不是的话也有可能是偶然事件，可以先用立春红染一下膜，看看你的蛋白转膜有没有问题，如果没有问题可以把染料洗掉继续做wb
内科小护士
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电压，marker的质量没掌握好，重新调整电压或者改变marker的质量再试一下。
医往情深丁香园
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转膜没转好，导致的可能有两个原因，电压和温度，改变温度和电压，重新做一下转膜。
兔子爱吃鱼
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应该是转膜的时候架子没弄好，中间有空隙
ZZDX-YILILI
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1.先换个Marker试试，看看是不是Marker的原因。如果还是这样，那就是转膜的时候中间地方太松了，没夹紧或者中间位置有气泡。
2.另外检查转膜是不是低温环境，如果温度高有可能造成小分子marker降解。
bamboopiggy
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是你转膜的夹子变形了。中间往外突出了，三明治夹心中间接触就差了，不光你的marker会这样，你的蛋白也会这样的，转不过去
水深先试浅
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可能是转膜没转好，下次用新配的电转液试试，如果还这样，可能就是marker问题了，联系技术看看怎么解决
一支肾上腺素
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可能是转膜buffer没配好，建议重新配制一下；应该继续往下做，一抗二抗以后曝光看看，有时候marker很淡但蛋白条带很清晰，这种情况也是有的。
小白野蛮成长
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把电压调到120V试一下 可能会有效果
dxy_pni5ki46
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消失的是小分子的marker吗，不知道转膜液里有没有加sds，加了sds的话可能有这种情况。我习惯恒压转，不确定恒流这个电流时间会不会转过了，也不排除是转膜时间太久。可以换一下转膜液和转膜条件试试。
jey1235
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也没说什么膜啊，NC可能出现转过头。推荐PVDF,然后买点好一些的品牌的，比如millipore的，我一般400mA 70min 湿转没有遇到过各种问题。
转膜的因素太多了，比如胶是否平整，膜是否平整，膜是否处理了，夹子紧不紧，是否有气泡，电压跳不跳？甚至buffer 配的好不好？等等
你这个情况还是要等做完一套显影再判断啊。万一只是你的marker质量不好，在膜上待不住。
建议这种问题，最好请教同实验室同设备使用同marker的做得好的哥哥姐姐们，他们会更有经验处理。针对自己实验室的WB永远上经验大于理论分析。
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