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敷完二抗后可以隔夜曝光吗?有影响吗?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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丁香实验

二抗孵育结束后可以隔夜曝光吗?需要重新再敷二抗吗?

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30 个回答

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医往情深丁香园

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可以隔夜曝光,一抗可以过夜敷隔日曝光都可以,二抗如果来不及当天曝光,不如就放在一抗里。
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是小杨同学

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可以隔夜曝光的,但是最好不要这么做,在tbst里面浸泡时间太长的话,有可能会让条带不清的
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内科小护士

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可以隔夜曝光的。以前试过,孵完二抗,没时间曝光可以浸泡放4度,第二天曝光,效果差不多。
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lzy必有我师

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可以隔夜曝光,样品不要反复冻融,煮样时间也不要太长
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dxyhsx123

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敷完二抗后洗干净,挡在TBST里面,可以第二天曝光,如果本身蛋白少,亮度低的话,不建议这么做。
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兔子爱吃鱼

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试过一次隔夜曝光,好像影响不大,是可以曝光出来的
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dxy_9kptsiw

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试过,可以,但是不建议。 如果可以还是尽快显影
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dxy_50tk4bh8

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可以的,但是可能结果会不是很好。图可能没那么好看了。
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一支肾上腺素

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没有问题,不过应避免反复冻融,可以在4度保存,一般重复回收使用2-3次是没问题的。
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zxb597

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在TBST中浸泡时间过长,可能导致条带不清,影响结果。
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dxy_h7vcp8v3

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可以隔夜曝光,最好把膜泡在TBST或者清水里。不用再次敷抗体。
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dxy_w4oj7yoe

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如果把膜一直泡在PBST或TBST里放在4℃的话,对酶应该是没什么太大影响,有可能整体信号会稍弱一点,如果曝不出来可以再敷一下二抗。另外就是保存的时候一定要把二抗洗干净,二抗时间太长背景会很高
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dxy_pggo2lp2

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是可以的。但是在TBST中浸泡时间过长,可能导致条带不清,对结果有影响。如果条件不允许,建议将条带在TBT中4℃保存。
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JCorona

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最好不要隔夜,因为大多数标记物都是酶,不冷冻保存的话容易变性,同理,一抗二抗和目标蛋白都是蛋白质,也容易降解、变性,而孵育过后的膜不宜冷冻,冰晶可能破坏其微观结构。一旦膜的结构被破坏,或者任何一个蛋白变性,再孵育二抗也无济于事,所以还是推荐孵育完二抗后立即曝光。
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于小闹0808

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是可以的,用TBST泡着,保持在4℃保存
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ZZDX-YILILI

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二抗敷育完尽量接着曝光,如果实在没有时间可以过夜曝光,但尽量放到0.05%TBST中,4℃中保存。
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jey1235

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都隔夜曝光了,信号还能相信吗?非特异性信号都出来了。如果检测如此困难,建议建议重新设计实验,隔夜曝光着实不可取。
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dxy_pni5ki46

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不太好,时间长了hrp活性会减弱,重新孵育二抗并不能结合上了,除非用抗体剥离液去除后重新孵育
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z流沙z

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可以洗完膜放4°,到时候直接测,不用重新孵
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dxy_qkedgrg7

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可以,之前我做的时候孵完二抗放两天都没什么问题,不影响的
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