18 个回答
红格子一号
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封闭可能出了问题或者牛奶没混匀，建议用抗体稀释液
水深先试浅
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斑点可能是牛奶没有溶解好，背景黑可能是封闭没有封好，延长封闭时间看看，也有可能是一抗的问题，一个一个排查吧
dxy_h7vcp8v3
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WB出现这种情况，其一是目的蛋白没有转上去，敷抗体之前用牛血清蛋白没有吧膜封闭完全，造成抗体识别了非特异性结合位点；其二，可能内参的膜和目的蛋白的膜，在一个盒子洗的膜，目的蛋白的膜没有处理好，建议两张膜分开处理，不要让膜叠到一起。
jey1235
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这种有一下可能：
1、封闭液失效，或者被污染，导致了膜完全没有经过封闭。
2、转膜是失败的，样品看护来拖尾非常严重。
3、一抗已经失去效价，导致在膜上随机结合。
4、二抗失效
ZZDX-YILILI
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1.考虑一抗是否特异。
2.封闭是否完全，看这个膜的情况感觉很多没有封闭好。
3.使用膜是是否有摩擦，感觉膜质量有问题。
dxy_bq4uxnd
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曝光时间久，显现出了膜上面的非特异，这种主要是要严格规范wb操作步骤，特别是转膜与洗膜的操作，一定要保持膜的干净。
dxy_pni5ki46
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看起来蛋白没有曝光出来，黑黑的一片是背景，可能是二抗没洗干净，也可能是转膜过程中的问题，可能转过了所以没有信号。
dxy_pggo2lp2
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第二张图看不清楚，就说第一张吧。我看曝光时间挺长的，不知道你用的是啥显影液，我用的是超敏感型一般不太会有这么长的时间。我光看图觉得可能是转膜的问题，可能是膜上没有蛋白。你这个黑乎乎的一片可能是显影液。如果你是连着内参一起转的，要考虑转膜时间和电流是不是一致。
dxy_4uyyu09r
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内参正常，大概率就是抗体不好用，建议换新的抗体或者想想其他办法，比如封闭的时候长一些，抗体少加一点
dxy_w4oj7yoe
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同学，你这个内参我也没看到很整齐呢，最好先确定一下你的wb整个过程有没有问题？糊成一片的话，有可能是转膜问题（染一下膜和胶看看条带情况），或者是一抗二抗时间太长，或者有非特异，导致背景很高
小白野蛮成长
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调整曝光时间 减少一抗回收次数 再洗几遍膜
verbalkint
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转膜三明治没贴好或者blocking不匀，另外蛋白量可能不够，那一大片有可能是单纯的ecl背景
隔壁家的小夜猫子
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转膜的时候好像糊了，另外你这个抗体是不是应该优化一下试试，看着二抗是用多了，一抗的特异性可能也不好
z流沙z
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这不算弥散条带吧，这可能都没有条带，曝光时间长导致的整个背景，可以增加上样量和抗体浓度
Guoood
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条带出现斑点除了需要排除转膜原因，还需要考虑是否为封闭是所用的牛奶未充分溶解，导致颗粒存在，使封闭效果不佳。
飞天幻雪
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没看到内参图片啊，如果内参结果非常好，目的蛋白弥散了，可以考虑抗体的原因，如果内参也是弥散的。有可能是降解了。也有可能是实验中用的试剂出了问题，需要逐一排查
bamboopiggy
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你这不是出现斑点啊，是抗体不好使，背景太脏，考虑换个抗体吧
vae1476
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内参没问题，则跑胶过程基本没问题，一抗效率应该太低了，所以没有特异条带，更换一抗
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