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多肽浓度会比蛋白浓度还要高的原因?
JCorona
原因:1.蛋白质具有三级结构,许多折叠、卷曲的部位往往无法被检测到,造成检测值偏低,酶解后许多被隐藏的信号释放到表面,检测值趋近于真实值;2.酶本身也是蛋白质,若是酶的添加量过多,则酶会催化自身水解,造成多肽量增多
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问
蛋白质质谱组学相关问题
医往情深丁香园
应该是不能用了,时间有点长,建议重新做一次吧,不然试试重新做也行。
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问
蛋白结合为什么荧光公定位能做出来免疫共沉淀不行?
是小杨同学
我觉得可以试一下加大样本量呢,沉淀的蛋白量可能有多少,然后可以试一下优化ip条件
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问
coip的对照相关的问题
是小杨同学
我觉得可能是input的浓度有点低了呢,或者是抗体的问题,如果是抗体的话可以跑wb去验证一下
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问
IB条带模糊/无条带的原因?
lzy必有我师
:1.确定B的抗体是否适合做IP。 2.确定样本中B的含量是否太低。3.还有就是AB之间不存在互作。
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问
CO-IP之后的蛋白质和磁珠分离的方法相关问题
小布丁瑶瑶
0.5-4微克/mg 总蛋白即可 一般抗体浓度都很高 1:200-1:500左右
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问
input control是什么意思?
医往情深丁香园
就是裂解的蛋白原液,如果目的蛋白表达量正常,这个是很容易曝光出来的。
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问
目的蛋白和内参的条带形状反方向弯曲的原因?
lzy必有我师
如果蛋白样品足够的话还是建议跑两块胶,分别看内参和蛋白;如果一定要在同一张膜上面看的话,可以先看目标蛋白的表达,再用stripping buffer孵育去除一抗,再重新封闭,按照一样的步骤看内参,但这种方法比较不好掌控,stripping不到位,原本的抗体会有残留,stripping过度的话,再看内参的信号会很差
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问
条带宽度不一样目标蛋白性状奇怪并且拖尾严重的原因
dxyhsx123
上样的孔径是否均一,浓缩胶和分离胶比例是否合适,是否混匀,有无气泡,跑胶电压和速度等方面调整。
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问
为什么有的蛋白可以测磷酸化有的测不了?
一支肾上腺素
磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分,处理不得当时,还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多,比如封闭问题,抗体问题,或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。
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问
转膜后蛋白异常的原因?
是小杨同学
我觉得可能是电压有点高,导致蛋白质降解了,然后可以换个电转仪器试试看
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问
GSTpulldown诱饵蛋白不结合柱子怎么办?
小布丁瑶瑶
可能是标签包起来了,可以尝试变性纯化
28 回答
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问
WB电泳过程中上样孔样品残留怎么办?
俗人无了
相同的情况,作者是怎么解决的?
23 回答
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问
免疫印迹中显色问题
是小杨同学
一般来说抗体的大小亚基是不会显色出来的吧,可以降低一下抗体的浓度试试
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问
WB内参跑不齐的原因是什么?
隔壁家的小夜猫子
细胞收的时候量不一样,测浓度,重新normalize
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问
目的抗体杂带太多,背景杂乱怎么办?
verbalkint
抗体不好,要么做ip检测,要么直接用标签抗体(gfp)不要用蛋白自己的抗体
17 回答
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问
内参GADPH出现弥散,并且有两条条带是为什么?
是小杨同学
我觉得可能是你的蛋白降解了,然后出现了两条带,最好用新鲜的蛋白来跑胶呢
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问
敷完二抗后可以隔夜曝光吗?有影响吗?
医往情深丁香园
可以隔夜曝光,一抗可以过夜敷隔日曝光都可以,二抗如果来不及当天曝光,不如就放在一抗里。
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问
WB转膜10KD的蛋白电转条件?
医往情深丁香园
我们湿转时转膜液中一般都是不加SDS的,而甲醇是必须加的,量通常在100-200ml,我们在做12KDa时甲醇150ml,条带ok,转膜液中改加甲醇试试吧。
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问
WB转膜SIRT1蛋白一直失败的原因?
医往情深丁香园
说明你抗体有问题或者目的蛋白表达量有问题。如果他的也转不过去。
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