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问
IB条带模糊/无条带的原因?
lzy必有我师
:1.确定B的抗体是否适合做IP。 2.确定样本中B的含量是否太低。3.还有就是AB之间不存在互作。
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问
CO-IP之后的蛋白质和磁珠分离的方法相关问题
小布丁瑶瑶
0.5-4微克/mg 总蛋白即可 一般抗体浓度都很高 1:200-1:500左右
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问
input control是什么意思?
医往情深丁香园
就是裂解的蛋白原液,如果目的蛋白表达量正常,这个是很容易曝光出来的。
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问
目的蛋白和内参的条带形状反方向弯曲的原因?
lzy必有我师
如果蛋白样品足够的话还是建议跑两块胶,分别看内参和蛋白;如果一定要在同一张膜上面看的话,可以先看目标蛋白的表达,再用stripping buffer孵育去除一抗,再重新封闭,按照一样的步骤看内参,但这种方法比较不好掌控,stripping不到位,原本的抗体会有残留,stripping过度的话,再看内参的信号会很差
19 回答
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问
条带宽度不一样目标蛋白性状奇怪并且拖尾严重的原因
dxyhsx123
上样的孔径是否均一,浓缩胶和分离胶比例是否合适,是否混匀,有无气泡,跑胶电压和速度等方面调整。
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问
为什么有的蛋白可以测磷酸化有的测不了?
一支肾上腺素
磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分,处理不得当时,还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多,比如封闭问题,抗体问题,或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。
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问
转膜后蛋白异常的原因?
是小杨同学
我觉得可能是电压有点高,导致蛋白质降解了,然后可以换个电转仪器试试看
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问
GSTpulldown诱饵蛋白不结合柱子怎么办?
小布丁瑶瑶
可能是标签包起来了,可以尝试变性纯化
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问
WB电泳过程中上样孔样品残留怎么办?
俗人无了
相同的情况,作者是怎么解决的?
23 回答
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问
免疫印迹中显色问题
是小杨同学
一般来说抗体的大小亚基是不会显色出来的吧,可以降低一下抗体的浓度试试
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问
WB内参跑不齐的原因是什么?
隔壁家的小夜猫子
细胞收的时候量不一样,测浓度,重新normalize
18 回答
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问
目的抗体杂带太多,背景杂乱怎么办?
verbalkint
抗体不好,要么做ip检测,要么直接用标签抗体(gfp)不要用蛋白自己的抗体
17 回答
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问
内参GADPH出现弥散,并且有两条条带是为什么?
是小杨同学
我觉得可能是你的蛋白降解了,然后出现了两条带,最好用新鲜的蛋白来跑胶呢
29 回答
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问
敷完二抗后可以隔夜曝光吗?有影响吗?
医往情深丁香园
可以隔夜曝光,一抗可以过夜敷隔日曝光都可以,二抗如果来不及当天曝光,不如就放在一抗里。
30 回答
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问
WB转膜10KD的蛋白电转条件?
医往情深丁香园
我们湿转时转膜液中一般都是不加SDS的,而甲醇是必须加的,量通常在100-200ml,我们在做12KDa时甲醇150ml,条带ok,转膜液中改加甲醇试试吧。
18 回答
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问
WB转膜SIRT1蛋白一直失败的原因?
医往情深丁香园
说明你抗体有问题或者目的蛋白表达量有问题。如果他的也转不过去。
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问
目的蛋白和内参实测分子量都比预期大是什么原因?
一支肾上腺素
因为内参有好几种,分子量差别也比较大,更换分子量与检测蛋白差距更大的内参就可以避免这个问题。
19 回答
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问
细胞蛋白做WB无趋势的原因?
隔壁家的小夜猫子
点太多了,你想看趋势的时候尽量少点,可以摸索几次,点少了之后内参也可能能更清楚地看出并不齐,可能需要重新normalize
15 回答
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问
wb一抗和二抗去除液的原理是什么?
小布丁瑶瑶
可以试着用一下膜再生液,等洗好后,再曝光看下还有没有条带,没有就可以孵育新抗体了
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问
分泌性蛋白浓缩后做WB,如何选择内参?
我也是锦鲤ye
内参的选择需要考虑实际的试验环境。
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