WB电泳过程中上样孔样品残留怎么办？
丁香实验
电泳过程中上样孔总是会有一些样品残留，虽然电泳的过程中也会都跑下来，但是严重影响结果。出现过很多次了，用的雅酶的制胶试剂盒，1.5mm，上样前对样品12000G离心3分钟，加的上清，每孔15ul。是什么原因怎么解决？ 
23 个回答
俗人无了
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相同的情况，作者是怎么解决的？
dxy_h9snbtq9
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是不是电压太高了啊，跑浓缩胶的时候可以把电压调低一些，我们实验室常用的电压是120V左右，跑分离胶常用电压是200V左右
一支肾上腺素
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不知道你这个是不是因为离心没离好，从内槽向外槽倒，我有次是分开倒的，就导致蛋白跑下不去，上样之前充分混匀。
红格子一号
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感觉样品或者样品提取液有问题，溴酚蓝析出
水深先试浅
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内槽电泳液得加满，让电荷形成循环
dxy_h7vcp8v3
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可能是你上样时没有完全吸到上清，吸入了一部分沉淀。建议增加样品的体积，让上清足够多，样品上样前增大离心时间，确保沉淀被离下去。其次，上样的时候枪头不要一直伸到最底，建议在离沉淀远的位置轻轻取样进行上样。
李瑞大
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1.loadingbuffer效果不好，无法把样品沉下去
2.样品甘油这种类似物比较多，导致样品上浮
jey1235
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这是因为样品中有某种物质与loading buffer产生了化学反应，造成了溴酚蓝析出。其实普通的loading buffer buffer上样pH一般在6-9之间，切勿样品超过此范围。跟胶没有关系。样品可以稀释一下或者换一下样品的buffer。
ZZDX-YILILI
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1.换下loading buffer试试看是否还会出现这种情况。
2.电泳缓冲液配置是否正确或者是否使用次数多了。
先从这两个方面排除下原因。
dxy_bq4uxnd
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蛋白提取过程中应该是未能完全裂解，导致样品中存在杂质，杂质较为粘稠，跑胶时会出现这样的结果。
此用户已注销
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我之前配胶都是自己配的溶液，没有试过试剂盒，出现这种情况也可能是样品的问题，组织样就很容易拖带，你可以把浓缩胶配的稍微多个3mm，用低电压跑多一点时间
dxy_pggo2lp2
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这个问题的背景描述的不是清晰，我就依据现有的背景回答。1.考虑loading buffer，可能是loading没有充分与蛋白结合。2.考虑提取蛋白的时候的离心条件，我一般是提的上清蛋白，离心条件14000rpm，10min，4℃。不知道你这个是不是因为离心没离好。3.running buffer 从内槽向外槽倒，我师妹有次是分开倒的，就导致蛋白跑下不去。4.上样之前充分混匀。
cathyxjjxjj
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样品量过多的话可以少上一点，比如上5微升，如果说是loadingbuffer里面染料过量的话可以让他跑出去或者后面固定的时候直接洗掉。
dxy_4uyyu09r
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我经常遇到加不进去的情况，有时候是胶配置的问题，你这个下次可以低电压多跑一段时间，他们就压在一起了。
Guoood
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上样前看看上样孔内是否有残胶在孔内或者其他杂质污染，上样前可以先用电泳液清洗下上样孔，可能会有改善。
verbalkint
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换一下loading，这个loading可能沉不下去，或者蛋白里有lipid污染导致较轻。另外stacking gel跑慢一点，压久一点
dxy_pni5ki46
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上样孔蛋白残留可能是没有彻底溶解，有可能变性不充分
dxy_w4oj7yoe
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应该是样品里有太多脂质或沉淀导致的，可以增加煮样时间和煮样后离心时间，吸样的时候沿着液面吸，尽量不要吸到沉淀，如果还不行的话也可以考虑增加loading的量
隔壁家的小夜猫子
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蛋白可能没沉，但是聚了，你可以加变性剂多点
飞天幻雪
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你这个残留是随机的还是每次都这几个样品，如果是随机的怀疑你胶配的有问题，如果是每次都这样。你样品有问题，建议每次再重新煮沸后再加样
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