26 个回答
是小杨同学
有帮助
我觉得可以试一下加大样本量呢，沉淀的蛋白量可能有多少，然后可以试一下优化ip条件
lzy必有我师
有帮助
IP是金标准，IF是辅助，可能原因1.免疫荧光假阳性；2.免疫共沉淀试剂盒的特异性不够，结合不上或者结合不牢；3.洗脱过程中，洗脱力过强或者洗脱次数过多，把目标蛋白也洗脱了
dxyhsx123
有帮助
荧光公定位和免疫共沉淀不是所有的蛋白都能同时做出来的，一些蛋白相互作用，会暴露出一些位点，体外一处理，就会变化，再加上一些抗体的特异性差，结果很不确定。
内科小护士
有帮助
可以尝试优化一下IP条件，或者使用其他检测蛋白互作的方法。
dxy_pggo2lp2
有帮助
如果IF可以做出来，IP做不出来可能是假阳性。IF上看见有共定位，可能是的细胞在那一刻两个蛋白刚好在空间上是处于同一位置，不能说两个蛋白有相互作用。IF是IP的辅助，IP是金标准。如果文献报道是互作蛋白，建议纯化提高蛋白浓度重复
JCorona
有帮助
可能的原因：1.免疫荧光假阳性；2.免疫共沉淀试剂盒的特异性不够，结合不上或者结合不牢；3.洗脱过程中，洗脱力过强或者洗脱次数过多，把目标蛋白也洗脱了
医往情深丁香园
有帮助
将洗脱液用于IB检测目的蛋白是否被拉下，确保工作后再进行后续实验。
vae1476
有帮助
免疫共沉淀需要更多的蛋白量，考虑加大样本量再试试
此用户已注销
有帮助
首先确认你的抗体能否用来做共沉淀，其次两个蛋白可能受其他因素影响，例如磷酸化等。
dxy_50tk4bh8
有帮助
沉淀的蛋白量少，免疫共沉淀没有达到足够的量，而荧光比较灵敏，即使丰度低也可以检测到
ZZDX-YILILI
有帮助
1.首先确定IP的抗体是否适合做IP，如果不适合，那抗体结合不上自然显示不出来。如何抗体合适摸索下投入的蛋白质和抗体的浓度，如果浓度都太低，最终显示不出来。
2.此外，共定位应该是细胞水平是检测，这种结合有可能是短暂的所以能看到有结合，但是蛋白互作类似体外实验，如果二者结合很弱在实验过程中外力影响就不一定能检测出来。
dxy_bq4uxnd
有帮助
这要看你是怎么做的蛋白共定位，是直接用两个荧光抗体染色后观察共定位，还是bifc共定位，不论哪种共定位的方法，都存在假阳性，荧光的结果只是个参考，CO-IP结果才是比较准确的。
dxy_qkedgrg7
有帮助
免疫荧光本来就不是很精确的验证蛋白互作的方法，一般都是先做co-ip，得出结果以后再做免疫荧光充实你的实验数据
一支肾上腺素
有帮助
可能的原因，长时间高功率的超声有可能导致蛋白变性，如果你的抗体识别的是蛋白的空间表位，那就有可能拉不下来。
dxy_h7vcp8v3
有帮助
这是两种不同的实验方法。检查后者的实验条件是否正确，是否因为实验条件不合适造成实验无期望结果。建议，如果还想做两个蛋白互做，可以采用ITC的方式进行检测。
jey1235
有帮助
荧光定位实际上是一种空间定位，不一定提示有真实的相互作用，如果有其他实验证明存在相互作用，IP不到有可能是IP的抗体或者效率存在问题。
建议共转这两个蛋白，看一下在细胞的表达情况，确定之后再用合适的抗体比如标签抗体一般出问题的情况不常见。
zxb597
有帮助
免疫共沉淀是建立在蛋白复合物成员间紧密结合的基础上，特点天然状态，还有蛋白复合物
dxy_4uyyu09r
有帮助
荧光共定位有高清图吗？这个要求挺高的，其实普通的分辨率下很有可能是假的，我们之前的经验就有一个看上去共定位很强，后来换了新的仪器测就能看出来并没有共定位，ip做不出来的时候，如果抗体没问题，表达量也还可以就要多考虑这个原因！
dxy_w4oj7yoe
有帮助
一方面，有共定位不一定有互作，或者说可能是互作比较弱，IP的buffer条件不合适，把弱互作的蛋白洗下来了，可以尝试优化一下IP条件，或者使用其他检测蛋白互作的方法，比如说酵母双杂，BiFC等
隔壁家的小夜猫子
有帮助
荧光共定位只能显示出位置上在一起，并不能说明两者是直接结合，而且免疫荧光染色本身就有很多背景。当然IP的条件是可以优化的，比如调整一下盐浓度和洗脱条件，让一些结合力比较弱的也能IP下来，如果调整了之后还是没有结合，只能说荧光共定位的结果并不真实。
相关产品推荐
相关问答
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序