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问
如何提高细胞样本rna提取的量
bamboopiggy
注意细胞和trizol的比例,一般情况,6cm皿长满,可以用1ml的trizol,然后收完不要立即提,室温放置半小时,充分裂解后再提。
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问
新型microRNA能帮助治疗肺癌吗?
府宅
肺癌中的microRNA-486是一种强效的抑癌分子,有助于调节肺癌细胞的增殖和迁移,并且诱导这些癌细胞程序性细胞死亡或细胞凋亡。有利于帮助治疗
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问
怎么用T4 RNA 连接酶链接RNA分子呢?
lzy必有我师
(二)操作方法1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下:供体 (donor)RNA 100-500ng受体 (acceptor)RNA 250ng10XT4RNA 连接酶缓冲液
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问
RNA提取,在液氮中研磨小鼠组织时,极容易把组织(如肾脏)蹦到研钵外面,有没有好的研磨方法?
bamboopiggy
将组织包到锡箔纸中,进行敲打,碎了后倒出
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问
配胶的时候一直不凝怎么回事
whilt-shirt
有可能是配胶试剂没混匀导致,也有可能是配方问题
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问
wb中杂带有很多,没法区分
dxy_gwrp7ndq
1.低效阻塞。实验中会应用到多种不同的封闭剂,某些非离子去污剂或蛋白质等封闭剂容易产生低效阻塞的影响。如果改变阻塞条件就可以解决此问题。2. 抗原浓度过低。信号增强可能会导致人工带的出现。因此可以适当考虑通过分级分离或免疫沉淀富集抗原。
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问
提rna的同时怎么把蛋白也提取出来?
bamboopiggy
有kit可以,酚氯仿抽提后,上层是rna,中间的白片是dna
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问
跑胶的时候总是跑不好,有拖尾现象,怎么样才能避免呢?
bamboopiggy
配胶的TAE要用带rna酶清除剂的水配,跑胶的也是如此
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问
DNA提取的注意事项有哪些?
闭门羹牛
尽量简化操作步骤,缩短提取过程,以减少各种有害因素对核酸的破坏。减少化学物质对DNA的降解,为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏,操作多在pH值4.0-10.0的条件下进行。 减少物理因素对DNA的降解,物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈振荡、搅拌等),细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂,DNase大量释放,样品反复冻融和高温等。
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问
探针法pcr低浓度模板复孔之间的差异大,除了加样问题还有什么原因会导致?
府宅
分装试剂时是否混匀,加模板时是否有挂壁
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问
做小鼠基因型鉴定,条带要么不出要么出了杂带,换了很多primer,体系,裂解液。求问大神解救😭该咋办?
dxy_gwrp7ndq
可以考虑优化抽提方法,保证基因组DNA 质量。在PCR 反应体系中,基因组DNA 的浓度也会影响PCR 的效率。基因组DNA 过多或过少都有可能导致PCR 扩增失败。可以考虑调整PCR 反应体系。若PCR 鉴定出现非特异性条带,可以考虑提高退火温度,以提高引物的特异性结合。
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问
多重pcr是将配好的已优化好的单重体系等体积混合,还是将各引物对和探针按优化后的比例依次加入buffer和酶中?那种方法比较好?
dxy_gwrp7ndq
按优化好的比例依次加入,这样可以不断调整反应条件,直至最佳反应条件
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问
RNA定量上样的相关问题
刹那芳华2333
排枪校准好,调好不会有很大误差
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问
请教关于吉姆萨染色实验的问题
bamboopiggy
注意吉姆萨燃料的浓度,可按照原来的浓度(引起皱缩的浓度),稀释后再用
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问
蛋白组学微量样本如何测定?
dxy_gwrp7ndq
可以利用纳米级的液相色谱串联质谱,能同时鉴定并定量少量组织样品中的数百个蛋白。
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问
实时荧光定量PCR反应
dxy_gwrp7ndq
两步法,三步法并没有本质区别,信号的读取都是在每一个延长结束后读取。定量PCR一开始的时候也是三步法的。两步法,是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度,而且定量PCR的产物都很短,需要的时候都短,所以两步法更方便。三步法的话,花的时间长,不利于快速实验。
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问
细胞经常染支原体怎么办,也在用杀支原体的药,就是经常反复
府宅
1)药物辅助加温处理:先用药物处理后,再将污染的组织培养物放在 41℃ 培养 18 小时,可杀死支原体,但对细胞有不良影响。2)免疫反应清除法:主要包括有动物体内接种除菌法和体外吞噬细胞吞噬法,前者是把受污染的细胞接种在动物皮下或腹腔中,借动物免疫系统消灭支原体,而细胞却能在体内继续生长,待一定时间后,从体内取出细胞再进行培养繁殖;而后者从动物腹腔采取巨噬细胞并对其进行纯化,加入被污染的细胞培养液
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问
反义RNA的制备中,如何去掉乙醇溶液?
bamboopiggy
乙醇洗涤rna沉淀后,分三次离心,第一次用1ml的枪尖吸,然后再次离心,用200ul的枪尖吸,第三次用10ul的枪尖吸,看着沉淀,逐渐由白色变为透明即可,当然也有人用65度加热5min来干燥,但是一般不推荐
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问
哺乳动物细胞胞质分离RNA时,如何去掉污染的DNA?
双螺旋转人生
1.添加gDNA remover,这样后续可以直接做逆转!2.如果你是大量样品准备做组学,可以用不同的吸附柱提法,有试剂盒是先柱吸附DNA,去除DNA,再另外的柱吸附RNA,最后洗下来比较纯净的RNA。
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问
细菌提RNA,需要培养到什么时期最好?
lzy必有我师
1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,然后匀浆。注意:速度不要太快,要匀一会挺一会,否则由于摩擦产热,RNA遇热会加速降解。如果一次做多个
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