做WB有什么要注意的吗

1.选择合适的分离胶浓度

2.选择合适的电压、电流

3.选择合适的一抗和二抗，并注意一抗二抗浓度和孵育条件（时间、温度等）

3.洗脱时注意时间，太长太短都有影响

4.配胶和转膜过程都要防止气泡

蛋白提取要避免降解，转膜注意不要使膜变热，抗体要选择对应的一抗二抗，封闭时间要充足，最好选用脱脂牛奶或者BSA

确实注意事项很多，虽说熟能生巧，但扎实的理论基础可以让你避免很多错误，多看一些前辈的经验。这里提醒一下刚开始做的时候注意控制好各步骤的时间，一抗二抗的浓度，甚至转膜时蛋白太大还要多加一些sds

有很多，第一恒压电泳恒流转膜，第二转膜时黑胶白膜，第三选择合适的封闭时间和封闭液，第四选择合适的一抗，第五选择和一抗对应的二抗，第六选择合适的发光液