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问
石蜡包埋组织可以提取RNA吗?怎么提取呢?
dxywode
可以。1. 自行准备:无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇,混匀;9mL加入51mL无水乙醇,混匀。b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇,混匀;18mL加入42mL无水乙醇,混匀。c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。 作者:清风拂面vv链接:https://
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问
如何提高转染成功率?
Guoood
首先跟细胞类型有关,挑选转染效率较高的细胞系。然后用转染试剂及载体用无血清培养基稀释,充分包裹30min,再加到低血清培养基培养的细胞。
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问
有没有推荐的提取rna快捷高效率的试剂盒?
养点鱼吃火锅
提RNA很快,15分钟-半小时
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问
流式图如何射门,原理是什么
txs900416
一般采用级联门圈门策略,首先圈出目标细胞群体,然后圈出单细胞群体,再通过标记的阴性和阳性选择出目的细胞。例如血液中的T细胞,先圈出PBMC门,再圈出单细胞门,再通过cd45+和cd3+圈出t细胞即可
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问
核酸检测的假阴性如何解决?
txs900416
具体因素包括:样本质量差,比如口咽等部位的呼吸道样本;样本收集的过早或过晚;没有正确保存、运输和处理样本;技术本身存在的原因,如病毒变异、PCR抑制等。只能多次采样进行检测,并更新技术手段才能避免
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问
实验有时候会出现误差,应该怎么样避免啊
Lv花开花落
1.多次测量取平均值2.使用精度高的仪器3改善测量方法
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问
wb实验中如何跑出水平的条带?蛋白拖尾现象怎么避免?
dxy_gwrp7ndq
避免拖尾:可以根据情况调整蛋白量,同时降低一抗的浓度,缩短一抗的时间。
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问
细胞培养时能不能更换培养基的种类?
RC0628
每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。
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问
Transzol提取RNA
xiaojie17
我也遇到过,老师说是杂质没去干净,或者rna太多了。最后测纯度确实是杂质没去干净。
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问
小鼠最大采血量是多少
小布丁瑶瑶
看情况以25g的成年小鼠为例,它的循环血量大约为1.8ml。以250g的成年大鼠为例,它的循环血量大约为16ml。
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问
每次做的MTT结果都有点不太一样,但趋势是一样的,除了考虑铺细胞的问题,还可以是什么呢?
三昧骨科
铺细胞前的计数要准确。同时不知道你用的什么细胞,如果是细胞株的话和代就没有关系了。然后你每次用同样试剂的话,加试剂的枪是否准确啊,再就是和个人手法有关系。建议把数据拿给老师看一下,一般都需要重复多做几次的,排除一些不好的实验结果。如果趋势一样,但是最后值差的很多,建议同样条件下重复多做几次,毕竟实验就是需要反复重复的
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问
单细胞测序如何学习分析
彭彭彭文
分亚群,第二步,寻找疾病mαrKer标志物,第三步,功能研究
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问
如何提高实验数据准确性?
小兮的十八天
实验设计无误,保证实验操作步骤标准无遗漏,至少设置三次重复实验。
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问
动物组织的切片做免疫荧光出现非特异性染色的原因是什么?
Kimser
1,染色时间过长,2,抗体浓度过高,3,甚至有时候贪多嚼不烂,一次性做太多切片,出现组织变干的情况,
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问
请问大家用什么稀释一抗和二抗呀,脱脂奶粉,TBS,TBST有什么区别?如果条带不好看,怎么判断是不是一抗的问题呢?
txs900416
一般用5%bsa-tbst或5%脱脂奶粉-tbst孵育,tbs和tbst的区别在于tbst中多了一个t,即吐温20,Tween 20 是非离子型去污剂。因为western中所用的膜可以与蛋白质结合,这样的话孵育过程中,抗体是能够与膜非特异性结合的,为了防止以后曝光造成胶片背景太高,在孵育抗体后,混有Tween 20的PBS 能够将非特异性结合的抗体洗掉,增加特异性。看一抗有没有问题建议使用阳性对照
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问
请问在wb实验中转膜后,发现所有的蛋白条带都在,只是颜色变淡了,有什么办法可以解决?
黎咖勒翟
转膜夹松动,下次多加一层滤纸。
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问
免疫组化有什么意义,准确性如何?
梁总的贴身医生
①恶性肿瘤的诊断和鉴别。②确定转移性恶性肿瘤的原发部位,有些肿瘤在发现的时候已经有转移了,而我们却发现的是转移部位,而不是原发部位,这时候免疫组化就可以帮助我们找到肿瘤的原发部位。③对某类肿瘤进行病理分型。④明确软组织(如肌肉、韧带、骨膜、脂肪等)肿瘤的正确组织学分类,明确软组织的诊断,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的。⑤
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问
免疫组化实验,切片厚度多少合适?
梁总的贴身医生
一般组织切多厚是依据实验目的而定的。一般大鼠大脑要做免疫组织化学的话,需要把细胞切开,抗体容易进到胞质(如果是胞核染色则需要进一步核膜打孔,跟细胞膜打孔一样,常用triton x-100),一般神经细胞的胞体的大小差异很大,小的直径仅5~6μm,大的可达100μm以上,结合文献会发现,经常切30um或者20um,这样可以切开多数的细胞
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问
条带为什么跑不出来?
woazan
如果你的抗体没问题(别人跑出来了),那么就是降解的可能性大,蛋白酶磷酸酶抑制剂这些最好换个好的牌子,提取组织蛋白要超声,可以加大上样量与阳性对照
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问
细胞RNA提取时trizol的量是多少?
dxy_za0jbge8
300μl细胞液+700trizol
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