孵一抗的量是按组织面积还是体积计算？大概量为多少比较合适？

按照面积计算，且在可以染出目的抗体的基础上尽量减少抗体浓度以减少由于边缘效应造成的组织边缘非特异性染色以及背景颜色非常强（也可以节省抗体），抗体稀释液可以覆盖组织一即可，不过，最主要的是防止染色孵育的时候抗体液风干，导致背景以及非特异性染色增强

按面积计算，抗体稀释液的体积可小些，将转的膜装入封口膜，用封膜机将封口膜边缘压的尽量小，不要压着转的膜就行，加入的体积够覆盖膜面积就行，一般1～2ml就够了。

取决于膜的面积，只要能有浸透膜就可以了

一般建议1.5ml