• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        做小鼠基因型鉴定,条带要么不出要么出了杂带,换了很多primer,体系,裂解液。求问大神解救😭该咋办?

        相关实验:核酸染色实验

        user-title

        芮语rain

        做小鼠基因型鉴定,条带要么不出要么出了杂带,换了很多primer,体系,裂解液。求问大神解救😭该咋办?

        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        二狗Echo

        有帮助

        小鼠基因型鉴定同时包含了2个实验步骤:1.动物组织基因组DNA提取;2.gDNA的PCR与电泳。建议分步确定实验体系,例如,Nanodrop检测抽提后的gDNA的OD值,是否满足260 280和230的设定比值来确认第一步;用实验室已确认的其他基因对应引物PCR进一步确定gDNA的质量和PCR酶对于该体系是否合适;若没有问题,则多设计几对引物用已知基因型的鼠gDNA做验证,选出合适的引物进行检测,最后如果有余力优化温控程序。如果杂带不能完全消失也没有关系,利用预测目的系列长度和已知对照样品确定主条带即可。

        user-title

        Amor良

        有帮助

        首先检查一下的dna浓度和质量

        其次确定合适的pcr反应条。

        最后合适的酶 合适的引物 反应条件。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        可以考虑优化抽提方法,保证基因组DNA 质量。在PCR 反应体系中,基因组DNA 的浓度也会影响PCR 的效率。基因组DNA 过多或过少都有可能导致PCR 扩增失败。可以考虑调整PCR 反应体系。若PCR 鉴定出现非特异性条带,可以考虑提高退火温度,以提高引物的特异性结合。

        user-title

        txs900416

        有帮助

        小鼠typing要把握的几个点:1、是组织消化是否得当,一般使用碱消化是没有什么问题的;2、primer只要特异性没问题,Tm恰当,是不会有什么问题的;3、Taq酶是一个比较重要的东西,我之前用一个公司的怎么都p不出,换了一个公司的就好了,主要原因是taq酶的特异性和扩增效率

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序