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实验问答

31,556,326 科研人在看

问western blot 实验步骤的细节问题

府宅

注意事项1、转膜条件：对于分子量10-15kDa的指标转膜时间不宜过长，100V、冰浴45min足矣；对于分子量指标150kDa以上的指标，100V、冰浴2h也足够了；其他介于15-150kDa之间的指标100V、冰浴1h完全可以保证效果。2、转膜操作：准备PVDF膜的大小要与切割后的凝胶大小一致或略小，滤纸和海绵大小也要一致；制作“三明治”不能太厚也不能太薄，太厚容易使胶变形，条带弯曲，太薄气泡

3 回答1583 围观

问为什么WB的条带很模糊？

whilt-shirt

是不是样本已经降解了，重新制备一批新样本试试；也可以调节成像系统的相机焦距试试

4 回答2739 围观

问shRNA和siRNA区别？

dxy_gwrp7ndq

相比化学合成的siRNA，shRNA具有更多优点：稳定性高、脱靶率低、作用时间长和易导入困难细胞等shRNA和siRNA的区别：

3 回答15751 围观

问RNA提取需要注意的事项有哪些？

崔果儿

1.操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩，手套。2.实验所涉及的离心管，Tip头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。3.实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保RNase-Free纪律二:阻止内源酶的活性4.选择合适的匀浆方法。5.选择合适的裂解液。6.控制好样品的起始量。7.任何裂解液系统在接近样品最大起始量时，抽提成功率急剧下降。8.RNA抽提成功的唯一经济的标准是后续实验的一次成功，而不

3 回答1301 围观

问western blot一定要内参吗？感觉内参变异很大啊

whilt-shirt

内参是需要的，根据不同的组织选择不用的内参。

3 回答1262 围观

问单细胞rna-seq测序的数据分析流程和bulk的rna-seq一样么。

dxy_gwrp7ndq

bulk的表达矩阵是reads比对到基因的数目；单细胞的表达矩阵是reads比对到某个细胞的某个基因的数目(barcode用来区分细胞；UMI用来区分转录本/基因)

1 回答2324 围观

问WB跑出来的条带很浅？但是样品已经很多了，该怎么办？

whilt-shirt

更换抗体，或者重新制备蛋白样本，提高样本浓度

2 回答926 围观

问请问跑wb的一抗和二抗最多能重复用几次呢？如果配好了暂时先不用，放在-40℃冰箱能保存多久？

whilt-shirt

重复用的次数要视情况而定，常规的用10来次不成问题，配好的抗体一般在4℃条件下能保存2-3个月

3 回答8286 围观

问石蜡切片和冰冻切片的比较？

崔果儿

手术台上当时取的叫（快速）冰冻切片，顾名思义，很快就出结果，医生在台上等候，根据病理科给出的冰冻切片的结果判断良恶性，从而确定切除范围。石蜡切片是术中切除的组织取一小部分，术后送病理科，由病理科在几天内（疑难时间延长）出结果，用于盖棺定论这个组织的良恶性，最为最终诊断。简单说，冰冻迅速而及时，但是有错误的几率，恶性判断为良性等；石蜡稳，病理科说是啥病外科医就认是啥病。

3 回答1796 围观

问细胞提蛋白，有时候会出现胶状物，说明书说是正常现象，可以加点sds，但是加完依旧是胶状的，是什么原因？

whilt-shirt

换专用的提取试剂盒试试吧，这有可能是细胞数太多导致的

3 回答4832 围观

问加了PMSF，为什么曝光出来条带和内参效果一样呢？

whilt-shirt

PMSF是蛋白酶抑制剂，是防止蛋白降解的，对内参和目的蛋白不会有影响。目的蛋白和内参效果一样可能是一开始实验就出了问题

1 回答611 围观

问哪种方法能够很好的进行蛋白印迹分析

whilt-shirt

常规用的是Western Blot，条带图用Image J 进行灰度分析

1 回答557 围观

问抗原修复如果使用EDTA修复法，用多少浓度的EDTA呢？

菲菲飞呀飞

EDTA的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。

3 回答2361 围观

问抗原修复如果用高压热修复，具体要求和步骤是怎么样的？

菲菲飞呀飞

玻片要置于金属架上1)材料及试剂。家用不锈钢高压锅。加热板”玻片架放置容器(容量大约400 500ml)’抗原修复缓冲液(TivEDTA pH9.0,构橼酸钠pH 6.0)2)方法1.将合适的抗原修复缓冲液加入高压锅内，然后将锅置于加热板并开至最大功率，此时不要把盖子盖紧。在等待煮沸过程中，进行脱蜡至水。2.煮沸后，将玻片从自来水中取出放入高压锅内。小心热溶液-使用镊子。依照说明书加上加压阀。3.

3 回答2481 围观

问免疫科研入门者怎么才能设计好完整的实验？

菲菲飞呀飞

1、明确探究目的和已有条件，制定计划与设计实验的过程。2、尝试选择科学探究的方法及所需要的器材。3、尝试考虑影响问题的主要因素，有控制变量的初步意识。4、认识制定计划与设计实验在科学探究中的作用。注意：1、要明确实验目的，设计的方案要与猜想紧密相连，并且能够验证猜想是否正确。2、要选择合适的研究方法。一般常用的方法有控制变量法、转换法、现象或数据归纳法等。3、要根据需要列出实验器材设计实验步骤和记

3 回答798 围观

问关于细胞培养怎么选择更合适的培养基？

whilt-shirt

首先看购买细胞公司提供的说明书，如果没有，去各个公司官网查，再不行就各个培养基都试试，先用1640

2 回答716 围观

问淋巴细胞培养管的选择 24 48孔

菲菲飞呀飞

淋巴细胞培养既可选择培养板(24、48、96孔、培养瓶，也可选择三角烧瓶、试管等器■进行培养有研究表明提取的淋巴细胞用1. 5ml离心管培养72小时细胞生长状况良好细胞数与培养前比较,差异无统计学意义(P 20 05) .用青霉素小瓶进行培养淋巴细胞生长也非常好。可以认为,对散在的细胞培养来说用小器皿具有以下优点: (1)便于操作1.5ml离心管为次性使用，青称崇小瓶可反复刷洗，而培养板、培养瓶价

3 回答987 围观

问ACTIN为啥有两个条带？

DXY泡沫呀

有实验技术的原因，曝光的时候会有底片轻微移动的现象,出现很接近的两条

3 回答811 围观

问骨组织wb内参不齐怎么整？

whilt-shirt

蛋白浓度一样不代表内参浓度一样，我们实验室一般现用BCA法测总蛋白浓度，第一次上样后根据内参调整上样量，这样内参就齐了

2 回答664 围观

问做实验老是没有重复性，不能确定自己操作准确，很苦恼，也不知道操作问题还是实验确实不行。有没有大佬指点

whilt-shirt

换个人同样的操作，或者自己一步步操作，找师兄师姐在旁边督促看看

2 回答430 围观

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