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实验问答

31,560,829 科研人在看

问用脱氧胆酸去干扰是直接加进去吗？浓度是多少呢？

dxy_gwrp7ndq

直接加入，脱氧胆酸的纯度为至少96%

1 回答675 围观

问IPTG诱导蛋白蛋白表达不出来

府宅

建议可以尝试改用酵母或者昆虫细胞表达。甚至直接用哺乳细胞表达。如果一定要用BL21表达，我的建议是尝试用较低浓度IPTG在较低温度比如室温下表达更长时间，温和的表达条件运气好的话能稍微让蛋白质没那么容易misfold，不过不要抱太大希望。如果还是表达不出来，截短蛋白到70kDa左右。专注于一部分蛋白

2 回答4165 围观

问WB条带不均一，颜色一半深一半浅是怎么回事？

whilt-shirt

有可能是发光液没加好，也有可能是转膜时问题，还有可能是抗体敷育时条带未完全浸泡在抗体稀释液里面

3 回答5156 围观

问蛋白质样本提纯总是不达标，怎么提高提纯纯度？

dxy_gwrp7ndq

1、延长裂解时间，并且反复吹打，10min吹打一次。2、改变方法：用细胞刮刀将细胞刮下，离心收集细胞，在离心管里裂解细胞（如有超声，可以加超声）

2 回答907 围观

问组织负八十保存后还能进行免疫组化检测吗？实在没有其他样品的情况下，怎么样尽量避免冰晶的影响？

whilt-shirt

可以的，只是组织结构会有些影响，可以考虑采用冰冻切片机切片，然后进行后续的步骤

1 回答607 围观

问多糖多酚植物RNA提取

goonQ2HM

天根的多糖多酚试剂盒挺好用的，就是有点贵

3 回答1305 围观

问蛋白质印迹细胞提取液问题？

dxy_gwrp7ndq

也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲液即可。

2 回答700 围观

问SLE中Sm抗体为何检测率这么低？

dxy_gwrp7ndq

抗 Sm 抗体在 SLE 中特异性高,但敏感性低

1 回答639 围观

问电泳的拍照后有阳性显示两条条带是什么原因？

dxy_gwrp7ndq

原因；样品分解，一抗特异性不好或者浓度太高，PVDF膜封闭不够彻底，抗体没有四度过夜，或者上样品太高等

2 回答1387 围观

问多聚甲醛固定与丙酮固定的区别？

Amor良

1、这两种方法基本效果都还可以。但要注意多聚甲醛固定时间长的话，一定要防止抗原被醛基封闭决定族。2、其实，丙酮的作用原理是溶解膜磷脂，所有的脂质双层（胞膜、核膜、细胞器膜等）将被破坏，但蛋白和多糖类不受影响。而丙酮固定后不需进行抗原修复，它是一种非交联固定剂。3、多聚甲醛固定对酶类和脂类保护的好，易与蛋白发生交联，所以一般经过甲醛或PFA固定后的标本一般需要抗原修复。

3 回答5908 围观

问污染的细胞怎么处理？可以挽救吗？

Guoood

细胞污染后一般很难救回来，加双抗救回来也很难保证细胞处理的效果，建议每次处理细胞都保证无菌操作，怕污染的话可以在细胞出现污染前加双抗预防。

3 回答1691 围观

问RNA提取没有沉淀是什么原因？

wuli猫宁

有时候看不到沉淀，说明你用的细胞或组织太少，RNA比较少，亦或者RNA不低，但看不到沉淀，可能离心时RNA没聚集在一起，散贴在管壁！对于这两种情况，不要灰心，实验不一定失败！取15ul的无RNA水（不要太多），把管壁好好洗洗，RNA就会溶解在水里，一般情况，RT后，也足够做好几次实验了！

3 回答2601 围观

问蛋白质实验相互作用的优势

dxy_gwrp7ndq

蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。

2 回答1090 围观

问何为基因工程抗体？？

dxy_gwrp7ndq

目前在临床试验中基因工程抗体约占生物制剂的30%。重组抗体的体积越来越小，或被重新构建成多价分子，或与其它分子相融合，如放射性核素、毒素、酶、脂质体和病毒。重组技术的出现使筛选、人源化、抗体的生产得到革新，并取代杂交瘤技术，从而使以抗体为基础的药剂设计成为可能。

2 回答1996 围观

问为什么蛋白电泳时不需要加冰，而转膜时需要？

whilt-shirt

电泳时用恒压，一般先低压（60或80V）后高压（120或150V），这时候对应的电流不高，一般最高都不超过100mA，而转膜时一般用的恒流（300mA），高电流通过自然产热量就大了

2 回答3594 围观

问为什么PCR测出来某基因表达高，但western测出来低表达

dxy_gwrp7ndq

1.所要检测的目的基因存在选择性剪切体，可以产生成熟的mRNA，但是不一定能翻译成蛋白质。2.做定量PCR的内参基因，最好与做western的内参基因保持一致. 3.注意转膜过程中蛋白质是否转移完全。

1 回答692 围观

问RNA浓度低/质量差的原因及解决办法有哪些？

dxy_gwrp7ndq

得率过低：提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底；解决方法：可以使用适当质量的组织或细胞进行提取，样本前处理一定要做好，裂解应充分。

1 回答3328 围观

问关于融合蛋白纯化的问题？

Amor良

1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。2、不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL～mg/mL。3、合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解;在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。5、避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性。6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。7、在缓

2 回答818 围观

问CsCl法从培养细胞中提取RNA时，RNA 的产量低的原因？

Amor良

1 ) 组织或细胞中 RNA 含量偏低：不同细胞或者组织中RNA的丰度不一样，RNA提取量也不一致。2 ) 样品起始量太少或者太多：样品起始量太少，则细胞组织中RNA含量较低，样品过多则超过裂解液的裂解能力，使得裂解不完全，从而RNA得率低。

2 回答905 围观

问RNA提取时，OD260/OD280比值偏低

仗剑走江湖

比值偏低，说明有蛋白污染；补救办法trizol法上清吸取少点300ul即可；异丙醇吸干净；酒精挥发干

4 回答6459 围观

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