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        ELISA试剂在对不同实验的选择上,需要遵循什么样的标准?

        相关实验:标记抗体的应用技术

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        dxy_y6z4ns0r

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        3 个回答

        user-title

        Kimser

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        根据抗体类型选择:

        首先看是单抗还是多抗,又或者两者结合。顾名思义,多抗能够确保捕获所有抗原,随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。所以,我们应该明确捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。

        user-title

        小小花卷00

        有帮助

        ① 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,应大于等于0.9900。

        ② 灵敏度:反应试剂盒的最低检测浓度

        ③ 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

        ④ 重复性:板内、板间变异系数

        ⑤ 回收率:判断实验的准确性和特异性

        user-title

        dxywode

        有帮助

        1.固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

        2. 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值best大而蛋白量best少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

        3.酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取"方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

        4. 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

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