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实验问答

28,254,335 科研人在看

问为什么冰冻切片不可以用甲醛固定

dxy_gwrp7ndq

如果用多聚甲醛或者是甲醛进行固定的话，组织速冻的过程中会产生冰晶，不利于组织的切片，并且影响片子的质量

3 回答3343 围观

问如何才能提高上机细胞的活率

府宅

磁珠分选效率会低一点，但细胞活性高。FACS分选的话要加双抗，注意无菌，分选的液体里面可以加血清湿润管子。

3 回答676 围观

问RNA干扰技术温度如何控制？

Kimser

在PCR仪上进行两步扩增反应：94℃和72℃。 PCR产物的纯化是4℃。

2 回答797 围观

问ELISA实验如何尽量避免假阴性和假阳性？

dxy_gwrp7ndq

引起 ELISA 测定错误结果的原因主要有：①标本因素（类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等干扰）②试剂因素（标本管中添加物质的影响）③操作因素（标本溶血、标本受细菌污染、标本凝集不全、标本保存不当）

4 回答1448 围观

问细胞转染si-RNA时，培养基加双抗会影响沉默效果吗？

府宅

大多数不可以添加，因为增加了细胞通透性，抗生素的进入会增加细胞的死亡，但Qiagen的hyperfect系列可以

3 回答1024 围观

问结果背景颜色过深是因为什么原因呢？哪些步骤需要注意呢？

菲菲飞呀飞

1）考虑一抗浓度高；2）然后调整DAB孵育时间；3）也要考虑血清封闭时间是否过短；4）适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。

3 回答378 围观

问孵一抗的量是按组织面积还是体积计算？大概量为多少比较合适？

dxy_61kek75

按照面积计算，且在可以染出目的抗体的基础上尽量减少抗体浓度以减少由于边缘效应造成的组织边缘非特异性染色以及背景颜色非常强（也可以节省抗体），抗体稀释液可以覆盖组织一即可，不过，最主要的是防止染色孵育的时候抗体液风干，导致背景以及非特异性染色增强

3 回答657 围观

问怎么用T4 RNA 连接酶链接RNA分子呢？

lzy必有我师

(二）操作方法1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：供体 (donor)RNA 100-500ng受体 (acceptor)RNA 250ng10XT4RNA 连接酶缓冲液

1 回答897 围观

问免疫组化结果如何判读？

菲菲飞呀飞

结果分析主要有两种方法，阳性着色细胞计数法和评分法。前者是在4undefined光镜下，随机10个视野下计数阳性着色细胞；后者则是在光学显微镜下按染色程度（0分阴性着色，1分淡黄色，2分浅褐色，3分深褐色）和阳性范围（1分0-25%，2分26-50%，3分51-75%，4分76-100%）评分，最终分数相加。

3 回答1163 围观

问配胶的时候一直不凝怎么回事

whilt-shirt

有可能是配胶试剂没混匀导致，也有可能是配方问题

3 回答592 围观

问大家都怎么防止蛋白降解啊？

whilt-shirt

1、在样品制备过程中添加蛋白酶抑制剂；2、样本用液氮保存，超低温下蛋白降解慢。

3 回答1072 围观

问WB总是做不出理想的条带肿么破？

飞天幻雪

做不出理想的条带是什么意思呀？内参不齐？没有目的条带？杂带太多？还是做出的趋势和实验预期不符合？？

3 回答757 围观

问ELISA试剂在对不同实验的选择上，需要遵循什么样的标准？

Kimser

根据抗体类型选择：首先看是单抗还是多抗，又或者两者结合。顾名思义，多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。所以，我们应该明确捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。

3 回答716 围观

问DNA提取的注意事项有哪些？

闭门羹牛

尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。减少化学物质对DNA的降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH值4.0-10.0的条件下进行。减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈振荡、搅拌等)，细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂，DNase大量释放，样品反复冻融和高温等。

3 回答2214 围观

问做小鼠基因型鉴定，条带要么不出要么出了杂带，换了很多primer，体系，裂解液。求问大神解救😭该咋办？

dxy_gwrp7ndq

可以考虑优化抽提方法，保证基因组DNA 质量。在PCR 反应体系中，基因组DNA 的浓度也会影响PCR 的效率。基因组DNA 过多或过少都有可能导致PCR 扩增失败。可以考虑调整PCR 反应体系。若PCR 鉴定出现非特异性条带，可以考虑提高退火温度，以提高引物的特异性结合。

4 回答1704 围观

问RNA定量上样的相关问题

刹那芳华2333

排枪校准好，调好不会有很大误差

3 回答468 围观

问请教关于吉姆萨染色实验的问题

bamboopiggy

注意吉姆萨燃料的浓度，可按照原来的浓度（引起皱缩的浓度），稀释后再用

2 回答701 围观

问反义RNA的制备中，如何去掉乙醇溶液？

bamboopiggy

乙醇洗涤rna沉淀后，分三次离心，第一次用1ml的枪尖吸，然后再次离心，用200ul的枪尖吸，第三次用10ul的枪尖吸，看着沉淀，逐渐由白色变为透明即可，当然也有人用65度加热5min来干燥，但是一般不推荐

3 回答560 围观

问求教RTPCR非特异性信号多的原因及解决办法？

whilt-shirt

1、引物为非特异性引物，优化扩增条件，可设置梯度Tm，摸索最佳的Tm值；2、引物浓度太高，适当降低引物浓度；3、可通过琼脂糖凝胶电泳确认引物二聚体；4、模板有基因组污染，重新逆转录cDNA

2 回答571 围观

问细菌提RNA，需要培养到什么时期最好？

lzy必有我师

1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个

4 回答1447 围观

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