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        细菌提RNA,需要培养到什么时期最好?

        相关实验:细菌 RNA 制备实验

        user-title

        fengjingyi

        想验证细菌基因敲除和过表达有没有成功,准备做RT-qPCR。细菌提RNA在什么时期提最好呀?

        wx-share
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        4 个回答

        user-title

        lzy必有我师

        有帮助

        1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。

        2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,然后匀浆。

        注意:速度不要太快,要匀一会挺一会,否则由于摩擦产热,RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取,也要这样做,更不能急。

        user-title

        花匠是自己

        有帮助
        1. 验证敲除和过表达效率的话,在对数生长期的中期;
        2. 如果敲除的基因影响细菌生长的话,建议与未敲除菌培养时间一致,在未敲除菌的对数生长后期一起取样,后续先将菌落浓度稀释为一致后提取RNA。
        3. 题目建议加上"效率",否则会以为是问"验证构建的敲除和过表达菌株是否正确",这样答案就是菌落PCR和测序了。
        user-title

        dxy_t7p3th22

        有帮助

        对数生长期,OD值0.6左右即可

        user-title

        府宅

        有帮助

        对数生长期最好,OD600大约在0.5左右

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