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一、前言植物细胞外囊泡（PENs），特别是具有药用价值的植物，中医上有天然的性味归经，具有靶向性药物递送潜力。但植物种类繁多、内含多种杂质、比较有提取难度，比如葛根、山药、石斛等。该指南将常见功效性植物按照「果实、花/叶、根茎、干品植物（花、根茎、种子）」进行分类，并加入大型真菌，分为五大类详细介绍前处理细节及产品推荐，特为有植物囊泡提取和研究需求的客户提供稳定实用的前处理建议。二、样本前处理指南1. 果实：如柠檬等。1）尽量选择新鲜果实，避开干瘪、发霉的果实，干果或果脯；2）出汁率：300~400 mL/kg；3）推荐榨汁机：手摇式碾磨榨汁机；4）果实质量参考：70 g 左右果实（不包括果皮），榨汁处理后得到 20~30 mL 原汁，按推荐试剂盒进行前处理后，浓缩 50 倍，最终可获得 400 μL 左右的植物囊泡。5）处理：① 薄皮果实洗净后，将果实切小块直接榨汁；② 厚皮果实（如柠檬）的果皮出汁量较低且含有大量杂质，需要去皮后切小块再榨汁。6）提取试剂盒推荐：宇玫博 UR5220 植物囊泡提取纯化试剂盒（多汁植物）。2. 花/叶：如玫瑰、芦荟等。1）尽量选择新鲜花/叶；2）出汁率

外泌体提取过程中，影响纯度的最大因素之一是杂蛋白，杂蛋白是令无数外泌体人为之头疼的痛点！杂蛋白来源于哪里呢？以 MSC 干细胞为例，在培养过程中的大量血清 (FBS)、人血小板裂解物 (HPL)、蛋白因子混合物的使用，这些都含大量外泌体杂质，其中一些杂质是蛋白因子，经过长期细胞培养也不会降解，增加了培养基的异源外泌体或者外泌体类似物，对于下游外泌体的制备带来诸多不可控的影响。如何解决杂蛋白问题呢？从实验设计的角度来说，在前端杂蛋白越少，意味着后端去除杂蛋白的方法和步骤越少，做过外泌体的朋友都知道，每减少一次纯化步骤，就能获取更多的外泌体，每增加一步，就会大幅度降低外泌体的得率。 比如超离得率 15%-20%、沉淀法得率 35%-40%，等等。因此，就 迫切需要一款无血清、低蛋白的化学成分确定的培养基 来满足 MSC 干细胞外泌体的上游细胞培养需要。其他的培养体系到底有什么问题？Fetal Bovine Serum（FBS） 一直是细胞培养的霸主，客户一般选用的培养体系是：普通 MSC 细胞培养基+FBS，营养是比较足的，但是对于外泌体研究却面临如下问题：1）胎牛血清里成分很多，生产工艺

间充质干细胞外泌体（MSC EXOs）近年来已经在伤口愈合、神经损伤、肝病以及新冠肺炎等领域被广泛研究应用。不少研究表明，在各种损伤和疾病模型中，MSC EXOs 可以作为间充质干细胞的替代选择。第四军医大学去年就在干细胞领域权威期刊Stem Cell Research & Therapy发表文章 [1]，发现 MSC EXOs 逆转肝纤维化，是间充质干细胞（MSCs）治疗肝脏疾病的重要机制。MSC EXOs 正逐渐成为再生医疗领域的「新武器」，也为临床疾病研究提供新思路。如何通过高纯度外泌体？加快研究速度外泌体相关研究越来越热，赛道也愈发精细，如何巧用外泌体，并让它服务于自己的课题呢？不论是 MSC EXOs 还是其他外泌体，高纯度提取一直是实验的前提。本文分享3 个影响外泌体结果准确性的因素，并给到大家详细的培养操作步骤参考，并总结操作过程中的4 个常见QA带你提升外泌体纯度。01 3 个因素影响外泌体结果准确性1. 血清：常规细胞培养使用胎牛血清 FBS + 基础培养基培养，但是胎牛血清中富含外泌体，后续培养后收集的细胞上清中的外泌体不确定是从细胞分泌的还是血清中来的，影

近期，来自广西大学动物科技学院的李一星教授和广西壮族自治区人民医院的周磊教授团队在 Imeta 杂志发表了题为「HLF and PPARα axis regulates metabolic‐associatedfatty liver disease through extracellular vesicles derivedfrom the intestinal microbiota」的科研论文，IF = 33.2。研究背景：代谢相关性脂肪肝（Metabolic‐associated fatty liver disease，MAFLD）是全球最常见的慢性肝病，影响约 25% 的普通人群和超过 50% 的代谢异常患者。肠道是脂质吸收的主要部位，对于脂质代谢的动态平衡非常重要。肝脏和肠道之间存在密切的生理联系，大约 70% 的肝脏血液供应来自肠道循环，通过门静脉将肠道的代谢物、内毒素和炎症介质输送到肝脏。肝脏分泌的胆汁酸和抗体反馈调节肠道屏障功能及菌群平衡，肠道菌群失调和屏障损伤导致内毒素血症，激活肝脏炎症和脂质沉积，促进 MAFLD 进展。肠道菌群释放的细胞外囊泡（fEVs）携带蛋白质、

近期，来自军事医学研究院生物工程研究所的魏从文教授团队在 Molecular cancer 杂志发表了题为「GP73-dependent regulation of exosome biogenesis promotes colorectal cancer liver metastasis」的科研论文，IF = 27.7。研究背景：结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）是全球第三大常见恶性肿瘤，也是导致癌症相关死亡的第二大原因。CRC 的进展是通过腺瘤到癌的序列，大约 70%的结直肠癌患者优先向肝脏转移（CRLM），且这些患者的预后较差，肝转移是这些患者死亡的主要原因。外泌体是细胞分泌的具有脂质双层膜的纳米囊泡。肿瘤来源的外泌体可介导肿瘤-间质通讯和转移前生态位的形成，并通过调节分子向靶细胞的水平转移来促进肿瘤进展、侵袭和转移。GP73 是一种高尔基体膜蛋白，其作用是通过调节上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT）相关因子的转运来调节癌症的转移。研究表明 GP73 与 MVBs 重叠，并通过其胆固醇结合能力刺激外泌体的

近期，来自四川大学华西医院的黄灿华教授和陈海宁教授团队在 Gut 杂志发表了题为「Extracellular vesicle-induced lipid dysregulation drives liver premetastatic niche formation in colorectal cancer」的科研论文，IF = 25.8。研究背景：肝转移是结直肠癌（CRC）患者死亡的主要原因，每年全球约有 90 万人死亡，超过 70%的 CRC 患者最终将发展为肝转移。转移前微环境（pre-metastatic niche，PMN）是在远处器官中形成的特殊微环境，可促进弥散性肿瘤细胞的存活和增殖，从而促进转移性定植。癌细胞释放的细胞外囊泡（EVs）等可溶性因子对 PMN 的建立和转移至关重要。近年来的研究发现，肿瘤来源的 EVs 能够调节肝脏功能并促进脂肪肝的形成，但 CRC 如何影响肝脏代谢并促进 PMN 形成的机制尚不清楚。研究成果及意义：在本研究中，作者首先通过脾脏注射 CRC 细胞（CT26）构建肝转移小鼠模型，并筛选出具有高肝转移潜力的细胞亚群（CT26R2）。然后从高转移

近期，来自广州海洋实验室的陈凯教授，昆明医科大学口腔医学院的杨禾丰教授和胡江天教授团队在 Bioactive Materials 杂志发表了题为「miR-423-5p-enriched small extracellular vesicles drive periodontal regeneration via Sfrp2+ cell expansion」的科研论文，IF = 20.3。研究背景：牙周缺损（periodontal defect）是牙周炎引发的成年人牙齿脱落的主要原因，严重损害身体健康和生活质量。现有的治疗方法（菌斑清除、药物治疗、手术）仅能控制病情，无法实现牙骨质、牙周韧带和牙槽骨的协同功能性再生。小细胞外囊泡（sEVs）作为细胞间通讯载体，可通过调控微环境促进组织再生，但因其成分复杂导致治疗效果不稳定，限制了临床转化。MicroRNA 是 sEVs 中富集的关键调节因子，可通过靶向下游基因来影响疾病进展和组织再生，作为 sEVs 的生物活性成分，miRNA 可调节关键细胞过程（增殖、分化和凋亡）。近期的研究表明，工程化囊泡以递送功能性 miRNA 或抑制有害 miRN

近期，来自四川大学华西医院的魏鑫教授和宋涂润教授团队在 International Journal of Surgery 杂志发表了题为「Human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles ameliorate kidneyischemia-reperfusion injury by suppression ofsenescent tubular epithelial cells: experimentalstudy.」的科研论文，IF = 12.5。研究背景：肾脏移植（Kidney transplantation）是治疗终末期肾病的最佳方法，但供体肾脏短缺的问题一直未解决。供体肾脏在移植过程中不可避免地会经历缺血和再灌注损伤，而边缘供体肾脏更容易受损且自我修复能力较差，导致移植后肾脏相关并发症的发生率较高。细胞衰老（Cellular senescence）是细胞在受到刺激后介于正常细胞和死亡细胞之间的一种状态，与组织损伤后的恶化和再生能力降低有关。在肾缺血再灌注损伤（ischemia/r

p53 蛋白是最重要的肿瘤抑制因子，被称作「基因组卫士」， 在预防和控制肿瘤的形成及发展中发挥着至关重要的作用。它能够被多种细胞应激信号激活，例如，在发生核仁应激时，游离的核糖体蛋白（如 RPL5 和 RPL11）从核仁释放到核质中，与 MDM2 结合，抑制 MDM2 对 p53 的泛素化降解，进而促进 p53 蛋白的稳定和活化。因此，将核仁蛋白作为靶点，通过触发核仁应激–p53 这一途径来抑制肿瘤的生长，有望成为一种有效的肿瘤靶向治疗策略。日前，复旦大学生物医学研究院/附属肿瘤医院周祥团队与南昌大学基础医学院陈加祥团队、南昌大学第一附属医院邓军团队以及新乡医学院健康中原研究院韩涛团队合作在 Advanced Science 期刊上发表了题为 Targeting BRIX1 via engineered exosomes induces nucleolar stress to suppress cancer progression 的研究论文，揭示了靶向抑制 BRIX1 的工程化外泌体可启动核仁应激-RPL5/RPL11-p53 信号抑制肿瘤进展。在该研究中，研究团队发现在肿瘤中高表达

近期，四川大学华西医院的李富宇教授团队在 Molecular cancer 杂志发表了题为「Exosomal long non-coding RNA TRPM2-AS promotes angiogenesis in gallbladder cancer through interacting with PABPC1 to activate NOTCH1 signaling pathway」的科研论文，IF = 37.3。研究背景：胆囊癌（gallbladder cancer，GBC）是一种常见的高死亡率胆道恶性肿瘤，占所有胆道肿瘤的 80%-95%。GBC 具有很强的侵袭和转移倾向，包括淋巴结、肝脏、血管和神经转移。由于 GBC 患者常被诊断为晚期，手术治疗效果普遍较差，因此迫切需要寻找新的有效的 GBC 分子靶点。异常血管生成是缺氧诱发恶性肿瘤的典型特征，其对 GBC 肿瘤的生长和侵袭至关重要，而 lncRNA 广泛参与 GBC 的恶性肿瘤。目前的相关研究中缺乏确凿的证据证实 lncRNA 与 GBC 中血管生成之间的相关性。研究成果及意义：作者收集了 60 个新鲜切除的 GBC

实验目的：通过 Aco600 染料标记外泌体，并与受体细胞共孵育，通过激光共聚焦显微镜观察外泌体被靶细胞的摄取情况。实验材料：外泌体红色荧光标记染料 Aco600（Umibio UR52423）Exosome 来自 MCF 细胞无血清培养基（Umibio，UR51102）条件下获得，通过超速离心方式获得。（也可直接采购 Umibio 的成品外泌体）Aco600-Exosome：24 孔板每孔外泌体总颗粒数:1×1010 个（5×109-1×1010），外泌体体积 100-300ul/孔实验内容：1. 外泌体荧光标记并去除游离染料1.1. 用 PBS 将提取的外泌体浓度调整到约 1×1011Particles /mL1.2. 配制染色孵育体系1.3. 去除游离染料染色完成后，于生物安全柜中加入 600μL PBS 在样品里，使用 100 KDa 超滤管，以 3000 ×g 的离心力离心 5 ~10 min， 进行超滤置换，去除溶液中游离的染料，将上室样品浓缩至原体积重复置换 2 次收集超滤管上室的样本, 送检 NTA(50μl)、BCA(50μl)2. 共孵育/细胞摄取2.1. 提前 2

为什么要做大规模提取？1）节省成本：Umibio 大规模提取，同比试剂盒等方法提取节省人力成本，物力成本等 50% 以上，而且体积越大，成本优势越高；2）提高效率：传统方法每个批次一般不会超过 300 ml，而大规模提取可以达数十升，一天内完成，以 10L 为例，时间可以压缩 90%，甚至更多；3）方便质控：每个批次通过连续进样，最终出来的成品，通过一次的提取，不用担心每个批次提取的差异过大，数据更稳定，有说服力；4）纯度飞跃：通过大规模提取工艺，可以大量的去除杂质，优化后纯度远远比常规试剂盒提取高，更好的保留外泌体的活性和形态；大规模提取是有参考的解决方案的，这两篇文献很好的做了阐释。关键步骤 [1]：● 收集条件培养基（CM）：收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基，经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。● 处理大体积培养基：对于大体积培养基（50 ml 至 200 mL），使用切向流过滤（TFF）系统进行浓缩和透析，然后加载到结合-洗脱分子筛层析（BE-SEC）柱上进行纯化。● 分离 EVs：根据 280 nm 紫外吸收色谱图收集外泌体样品

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