AAV 在肝脏研究中的应用策略

在肝脏中应用较多的有 AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV8 及 AAV-DJ 等血清型：

 

Mouse：AAV8、AAV-DJ 对 mouse 肝脏均具有较强的亲嗜性，其中 AAV8 嗜肝性更强，用于活体动物注射表现为免疫原性低， 感染效率高；AAV-DJ 的体内肝细胞转导效率与 AAV8 相近，且在体外实验中也能表现出较强的感染效率。

 

Rat：AAV1、AAV2 对 rat 肝脏均具有较强的亲嗜性，AAV8 并不推荐，因为感染效率并不优秀。

 

注意事项：

① 小鼠的品系与性别会影响到感染效率，一般会选择雄性小鼠做实验。

② AAV2/3B 载体对人肝脏的感染效率明显，对 NHPS 也有效，但不能有效地转导 MOUSE 肝脏。

 

AAV 在肝脏应用中的局限及解决方式

肝细胞的自我更新会稀释体内 AAV 导致降低转导效率

重新注射新的血清型

使用药物阻断免疫应答重新注射同种血清型

AAV 基因整合到小鼠基因组上

 

体内预存的抗 AAV 中和抗体降低转导效率

实验前做中和抗体预筛，选择无中和抗体的小鼠

使用不同的血清型进行小鼠实验

预先处理小鼠来抑制其免疫应答再进行小鼠实验

 

AAV 载体包装能力有限性

大基因片段分两段用不同的载体分别进入体内，在体内进行同源重组

目的基因表达蛋白的轻链和重链放在不同载体上，在体内表内后也会自己重组

 

遗传毒性

肝细胞的自我更新增加 AAV 基因整合到小鼠体内基因组上的概率，AAV 基因组整合诱导小鼠肝细胞癌（HCC）的发生。