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蛋白纯化实验宝典
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问
为什么蛋白纯化后分子量变小了？
Eason老歌迷
这个属于正常，纯化后有洗脱，浓度更纯，可能分子量就变小了。
2 回答
1148 围观
问
蛋白纯化
loveliufudan
如果质谱检测结果显示聚合物过多，无法确定目的蛋白的分子量，可以尝试以下方法去除聚合物：1.增加蛋白质水解步骤。在发酵液中增加蛋白质水解步骤可以切断蛋白质的聚合物，使得质谱检测更加准确。2.使用蛋白质纯化技术。可以使用蛋白质纯化技术，如柱色谱、电苯胺凝胶等，去除蛋白质中的聚合物。3.使用蛋白质剪接酶。可以使用蛋白质剪接酶，如热心菌肽酶、信使RNA酶等，去除蛋白质中的聚合物。4.使用离子交换层析。离子
3 回答
414 围观
问
蛋白纯化
汤姆卜丽波
一般还是透析一下，才能达到你要的浓度
4 回答
279 围观
问
蛋白纯化
Dr_劉医生
看你的蛋白浓度，低浓度蛋白可以先标签亲和层析，再离子交换层析，最后用分子筛。
3 回答
372 围观
问
蛋白纯化有活性无条带
bamboopiggy
你的酶活性太高了，可能蛋白浓度还不够wb检测的，那点点蛋白的酶活性就够了。
2 回答
597 围观
问
求助，为啥这His标签蛋白纯化杂带这么顽强呢！
huarenqiang5
主要考虑以下几点：1、洗脱条件太温和。2、蛋白在柱子中沉淀。3、非特异性的疏水或者其他作用。4、蛋白和柱子接触时间过长。
3 回答
955 围观
问
最近在做GST标签蛋白过柱，用的是天地人和的GlutathineBeads重力柱，蛋白带上GST101KD
土井挞克树
最好是现用现配，配好的容易产生沉淀。
2 回答
861 围观
问
蛋白纯化有杂带怎么办
dxy_qm66y5m7
如果是his标签的话，首先与填料结合时使用的buffer里可以加点咪唑这样可以减少特异性结合，其次洗脱的时候可以适当提高咪唑浓度，加强对杂蛋白洗脱，最后就是更换填料的类型。以上只是对his标签蛋白提纯的优化，希望有帮助。
4 回答
2341 围观
问
蛋白纯化时超声多久以及功率多大比较合适？
迟C迟
保持低温，400W ，工作5秒间隔5秒，大概重复10-20次吧。
3 回答
3232 围观
问
蛋白纯化过程中，37℃过夜摇菌产量不丰富，如果提高摇菌产量？
bamboopiggy
做预实验，确定到底是什么温度，什么转速，会影响你菌的产量，还有就是看你用的什么表达载体，不同得载体，摇菌的要求也不一样
3 回答
666 围观
问
PGEX-4T3-GST-HIF1α蛋白纯化没有条带是为什么呢？
dxy_yrovq1i9
蛋白太大了，GST不好表达。把GST标签换成His吧，基本可以一把出。
3 回答
551 围观
问
原核蛋白纯化，上清跑胶有带，纯化后没带是什么原因
yangyang214
检测结合后的上清，以及beads，看是没结合上还是没洗脱下来。
5 回答
907 围观
问
蛋白纯化问题，换了不同载体，不同感受态，都表达不出目的蛋白
Eason老歌迷
感觉还是你的质粒没有构建好，你可以查查文献，看大家表达这个目的蛋白都用什么载体。
4 回答
672 围观
问
蛋白纯化有杂质怎么办？
bamboopiggy
可以在上柱前，多离心几次，去掉杂质，如果是杂带的话，就挂柱以后，多洗几次。
4 回答
1675 围观
问
蛋白纯化时为什么检测不到杂蛋白？
kedaxiaoyu
穿透里检测也没有蛋白条带吗？敢问你是用什么洗脱液洗脱的，一般都是用咪唑，0.5M的咪唑柱子上的所有的蛋白基本上都就洗下来了（如果咪唑实在洗不下来的话可以用EDTA洗）……至于你所说的纯化得到目的蛋白，这个咪唑的洗脱浓度还得靠你自己去摸索。你说的是蛋白洗不下来，建议你如果是用低于0.5M的咪唑洗的话，可以考虑0-0.5M的咪唑走个短点的线性梯度，可以大概看下目的蛋白洗脱的大致咪唑浓度。
4 回答
3673 围观
问
常用的蛋白纯化技术有什么？怎么在大肠杆菌、细胞中进行表达？
我是金博士
根据你想要表达的蛋白，查找基因，构建到原核载体上，在大肠杆菌中表达，然后进行纯化。
1 回答
2102 围观
问
蛋白纯化常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象，怎么解决？
桐轩456
首先我们要知道包涵体形成是因为外源性重组蛋白在高表达时，由于蛋白折叠辅助因子不足，在蛋白折叠之前分子间连接的疏水表面暴露在外面，导致折叠中间体大量堆积，并且这些中间体对蛋白酶的降解有抑制作用；对于大量折叠错误蛋白的出现，重组细菌体内缺乏相应的反应机制来恢复蛋白的正确折叠；促进细胞表达的蛋白多肽的溶解和正确折叠功能的丧失；蛋白或多肽自身结构在热力学和动力学上失衡；一些环境因素(如高温、酸性介质)能明
4 回答
1035 围观
问
怎样有效减少His标签蛋白纯化效果不理想的问题？
迟C迟
1、His标签在中性或碱性条件（pH7~8）下，与Ni2+有更强的结合力，与Tris-HCl缓冲液相比，在磷酸缓冲液中His标签表现出与Ni2+更强的结合力。2、HisTrap HP和HisTrap FF的蛋白结合载量都是至少40mg (His) 6重组蛋白。大家可以根据填料的结合载量选择预装柱和填料的规格。3、如果目标蛋白中的咪唑需要去除，可以根据样品体积选择适合的上机脱盐柱（HiTrap De
5 回答
1049 围观
问
关于融合蛋白纯化的问题？
Amor良
1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。2、不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL～mg/mL。3、合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解;在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。5、避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性。6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。7、在缓
2 回答
462 围观
问
蛋白纯化常用的标签有哪些？
dxy_gwrp7ndq
常用的标签有His标签、GST标签、Strep II标签、MBP标签、Flag标签、 Myc标签、SUMO标签、组合式的双标签
6 回答
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