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        PGEX-4T3-GST-HIF1α蛋白纯化没有条带是为什么呢?

        相关实验:蛋白质含量测定实验

        user-title

        aIraSOG7

        做HIF-1α的带GST标签的蛋白纯化,纯化出来的蛋白检测浓度都挺高的,但用考马斯亮蓝检测却没有条带,这是为什么呢,怎么解决?如果有位置大概多少呢?

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        3 个回答

        user-title

        dxy_yrovq1i9

        有帮助

        蛋白太大了,GST不好表达。把GST标签换成His吧,基本可以一把出。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你应该是没有表达成功,测到的蛋白浓度可能是一些杂质。GST 26kd, hif1a 93kd合起来大概119kd

        user-title

        aIraSOG7user-title

        这样说可能确实 因为hif的wb检测是120左右 所以我就有点迷惑了 跑出来是这样 就是都不对对吗😭😭 图片描述

        user-title

        冷泉港蛋白

        有帮助

        1.分子量=27+92.6=119.6KD 见下图

        图片描述

        2.原核系统应该表达不了这么大的蛋白,应该是没有表达成功

        3.为什么检测有颜色:可能是你加错样品了

        4.如何解决:更换真核表达系统或截断表达

        最好把你小样诱导的图片放上去,这样好分析。如果小样诱导没有表达,就不用做大样纯化了。

        user-title

        aIraSOG7user-title

        那这种就是不对的吗😭

        图片描述

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