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        蛋白纯化有杂带怎么办

        相关实验:免疫球蛋白纯化技术

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        sheng2321647336

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        4 个回答

        user-title

        dxy_qm66y5m7

        有帮助

        如果是his标签的话,首先与填料结合时使用的buffer里可以加点咪唑这样可以减少特异性结合,其次洗脱的时候可以适当提高咪唑浓度,加强对杂蛋白洗脱,最后就是更换填料的类型。以上只是对his标签蛋白提纯的优化,希望有帮助。

        user-title

        Lv花开花落

        有帮助

        建议可以采用不同的清洗方法来提高载量:
        1) 较温和的清洗方法
        为了去除沉淀或变性物质,可以尝试用2倍柱体积的6M盐酸胍或8M尿素洗涤,然后用5倍柱体积的缓冲液洗涤;为去除疏水结合的物质,可以尝试2倍柱体积1%的Triton X-100洗涤,然后用5倍柱体积的缓冲液洗涤。若改变不明显,可以选择下面更强烈的清洗方法。
        2) 更强烈的清洗方法
        首先用5-10倍柱体积的脱镍缓冲液(20 mM 磷酸钠, 0.5 M NaCl, 50 mM EDTA, pH 7.4)洗涤,迚行脱镍操作,然后用5-10倍柱体积的平衡缓冲液冲洗,最后用5-10倍柱体积的双蒸水冲洗;
        随后迚行清洗操作,去除离子型杂蛋白,可以用5倍柱体积的1.5 M NaCl溶液,然后10倍柱体积的双蒸水冲洗;去除沉淀或变性蛋白,可以用1M氢氧化钠溶液,结合1-2小时,然后用10倍柱体积的平衡缓冲液和10倍柱体积的双蒸水迚行冲洗;去除疏水蛋白或者脂蛋白,可以用5-10倍柱体积的30%异丙醇溶液清洗,然后10倍柱体积的双蒸水洗涤;最后迚行生镍操作,用0.1M硫酸镍上柱,随后5倍柱体积的双蒸水和平衡缓冲液迚行洗涤,如需保存,保存在20%乙醇溶液即可。

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        未来9

        有帮助

        如果用的镍柱纯化,通常这种情况下镍柱二次纯化效果也不会太好 因为杂带也是能够结合镍柱的

        可以考虑二次纯化时改用别的办法 比如离子交换,参考GE的蛋白纯化手册

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        bamboopiggy

        有帮助

        将上样蛋白稀释一下,过柱后,多洗几次试试。

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