蛋白纯化有杂质怎么办？

可以在上柱前，多离心几次，去掉杂质，如果是杂带的话，就挂柱以后，多洗几次。

1.优化包涵体洗涤，可以使用去污剂、低浓度尿素
2.溶解注意完全变性，以及二硫键打开
3.确认使用的是什么镍柱料，NTA、IDA还是其它，优化洗杂咪唑浓度，并将盐浓度提高到300-500，降低非特异性吸附
4.如果纯度不行，可以根据等电点结合离子柱纯化，镍柱低浓度咪唑洗杂后，用无盐Buffer wash一下，再用无盐buffer+250mM咪唑洗脱

结合核酸杂质可以考虑用肝素柱进一步纯化。镍柱纯化的时候用咪唑梯度浓度洗杂，一般用低浓度（10 mM）的溶液洗，如果有chaperone的话可以用高盐洗一下

a. 蛋白酶降解部分目的蛋白：添加蛋白酶抑制剂改进

b. 杂蛋白与洗脱柱亲和力高：优化咪唑浓度或改善 pH、NaCl 浓度

c. 杂质蛋白与目的蛋白相互作用：超声前加入去垢剂或还原剂减少非特异性作用