实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问Elisa的试剂为什么必须先在室温平衡，目的和原理是什么

yfcwyh

在临床实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA试剂盒测定中试剂的准备zui为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地

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问nk细胞上每个受体的功能怎么研究

yfcwyh

NK细胞的三重武功：自身受体、ADCC、CAR-NK，目前用于肿瘤免疫治疗的NK细胞策略有：体外活化的自体或异体NK细胞治疗；联合NK细胞和单抗药（如免疫检查点抑制剂）来诱导抗体特异的细胞毒性；构建CAR-NK细胞免疫疗法。

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问免疫组化过程中要注意哪些问题？如何确定抗体的滴度？

小暮

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问在免疫组织化学的染色过程中，脱片产生的原因和如何防止脱片？

郭郭的郭郭

1.多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的，后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子，要好一点。2.组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切得厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。3.组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。4.没烤好，时间短温度不够之类。

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问消除过氧化物酶，用过氧化氢的多吗？成品的内源性氧化物酶阻断剂效果咋样？

小布丁瑶瑶

消除过氧化物酶实验室用过氧化氢挺多的，成品的内源性氧化物阻断剂过氧化酶是催化剂，是蛋白质成分，效果挺好的，希望帮到您喔。

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问免疫荧光是选石蜡切片好还是冰冻切片好？

Kimser

个人倾向于石蜡切片，毕竟条件有限，虽然可能稍微麻烦点，时间长点，但是保存的时间也长，这点挺不错的

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问需要自己制备特异性抗体吗，得到抗体之后再怎么操作呢

小暮

一般自己做课题制备不了特异性抗体吧，特异性抗体不都是买文献介绍的吗？至于得到抗体后怎么操作看你要做什么实验吧，WB？ELASA？CHIP？都是看抗原和特异性抗体结合

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问请问可不可以同一个共聚焦样品，同时染红光和绿光，然后测共定位情况啊？

dxy_8y6odnaq

可以例如经典死活双染 Calcein AM 和PI 但是需要考虑串色问题（选择合适波长可避免）

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问用血清孵育过的细菌，不孵一抗，只用FITC标记的抗鼠的二抗孵育，当做阴性对照，阴性值特别高，请问是血清中的什么东西能与二抗反应吗

dxywode

免疫组化中的封闭血清，不能选择和一抗同源的，否则会出现假阳性；因为二抗会和血清中的Ig反应。而免疫组化的替代对照里，用的也是和实验一抗同源的血清，出来的结果理论上却应该是阴性的——说明阳性结果是与特异性抗体结合产生的，而不是血清中存在的。

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问补体激活途径有哪些？有何区别？

此用户已注销

3条途径:经典途径，旁路途经，mbl途径①溶解和杀伤作用：细菌进入机体后，细菌的细胞壁脂多糖可通过替代激活途径激活C3（属非特异性免疫），细菌与特异性抗体结合后可通过经典激活途径激活补体（属特异性免疫）。2.免疫粘附作用：与C3b结合的颗粒或抗原-抗体复合物，有粘附灵长类红细胞或非灵长类血小板的能力。③趋化作用：补体在激活过程中释放的C3a、C5a、C567等对中性粒细胞和巨噬细胞有趋化作用，可吸

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问免疫荧光中荧光信号无细胞形态是什么情况？

dxy_8y6odnaq

封闭时间不够或浓度不够都有可能导致一些抗体非特异性吸附另外在染色过程中需要保证湿润的环境否则也会影响染色

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问酶联免疫吸附试验中的酶结合物中对酶的要求有哪些？该怎么选择？

郭郭的郭郭

酶的要求：一个酶蛋白分子每分钟可催化103～104个底物分子转变成有色产物。用于标记的酶应符合：首先活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。然后易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。并且作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。还要用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激

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问免疫透射比浊法有没有更显著的方法减少效果影响

郭郭的郭郭

透射免疫比浊法是根据抗原抗体结合后引起液体介质浊度改变，使光线透过量减少，在一定范围内，透射光被吸收量与IC量呈正相关，依所测吸光度值推算待测抗原量的分析技术。主要注意抗原或抗体不要量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差；可以减少效果影响。还有就是应维持反应管中抗体蛋白始终过剩；不要受到脂血的影响。

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问双向免疫扩散实验结果问题

郭郭的郭郭

根据抗原的成份可有以下三种现象：（1）若二孔中的抗原相同，与相应抗体形成的沉淀线融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，当抗血清中分别含有与抗原相应的抗体时，则形成的沉淀线相交叉，也就是沉淀线弧支线；（3）若两孔中抗原部分相同，抗血清中有各相应的抗体，形成的沉淀线相切。

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问用51cr铬酸钠标记靶细胞

dxywode

首先用培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养液悬浮细胞，置37℃水浴30分钟，以减少非特异的自然释放。离心200×g 10分钟，去上清液。

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问免疫电泳检测粪内贾第虫抗原诊断问题

郭郭的郭郭

免疫诊断为辅助诊断，主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接荧光抗体试验（IFA）和对流免疫电泳（CIE）等方法，其中ELISA简单易行，检出率高（92%～98.7%）等特点，适用于流行病学的调查。CIE可达94%，均可诊断粪内贾第虫。

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问目前有哪些成熟的技术已经应用的有哪些这些应用会人类带来哪些变化整体的发展方向是什么这其中有什么样的个人发展机会

郭郭的郭郭

机器人手术革新，机器人手术用于微创手术，有助于提高精确度，控制力和灵活性。在手术机器人帮助下，外科医生可以执行非常复杂的手术，否则这些手术非常困难或不可能执行。随着技术的改进，它可以与增强现实相结合，以允许外科医生在操作的同时实时查看患者的其他重要信息。虽然手术机器人的发明引起了人们对机器人最终将取代人类外科医生的担忧，但它很可能仅用于协助和增强外科医生的工作。

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问常用的去除内源性酶的方法是3%过氧化氢水溶液。但在含有丰富血细胞的标本中，会有气泡现象，是否有可替代去除方法呢？

郭郭的郭郭

如果采用过氧化物酶的检测系统，必须进行内源性过氧化物酶封闭处理。代替过氧化氢水溶液，加还原性物质比较好，硫代硫酸钠、亚硫酸钠、保险粉之类的。方便搞到酶的话，酶也是不错的。另外，你最好说一下水里还有什么产物，看一下对这些东西对你的产物有没有影响。降温，加入亚硫酸钠水溶液洗涤就好了，双氧水在高温情况下，对你产品看否有影响的。如果有，那就改方法，萃取出来，分相，再去亚硫酸钠洗涤的。

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问胰腺组织样本如何处理？

郭郭的郭郭

胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。胰腺组织含多种类型的细胞，要想提取胰岛A细胞的RNA，首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来，可以用流式细胞分选或磁珠分选等。获得高纯度的胰岛A细胞后，再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了。

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问大家好，请问细胞的免疫荧光过程中，涉及到GFAP的染色，破膜的影响大吗？在抗体稀释液中是否添加triton以及合适的比例呢？

dxy_cnbwb4m9

破膜在IF中是必要的你需要控制好时间和tritonx100浓度。一般protocol是室温10分钟0.5%浓度，你可以参考一下然后适当降低时间和浓度如果条件太剧烈就会看到细胞膜破洞

3 回答1600 围观

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