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问
96孔板,细胞洗板,枪头怎么不戳破细胞层,还能将培养液吸干
府宅
把细胞培养基靠一侧吸出来,尽量减少与板底部的接触,然后还要加pbs或者培养基洗2次,洗残余的药物(细胞未摄取的药物)
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问
96孔细胞板洗板,细胞老是萎缩或者没了
dxy_gwrp7ndq
可以用排枪轻微吸打,然后再把细胞培养基靠一侧吸出来,尽量减少与板底部的接触,用吸水纸吸一下
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问
免疫组化的切片相关问题
府宅
冰冻切片相比较于石蜡切片简单易行,一般进行固定脱水后,固定于包埋剂就可以在冰冻切片机进行切片。有些新鲜标本可以直接取材后,冷冻托涂包埋剂后置于冷冻托上速冻,冻好后立即切片。冰冻切片最重要的是防止样品中冰晶的出现,一般可以通过速冻的方法使组织温度骤降,减少样品内冰晶的形成。也可以将组织置于20%~30%蔗糖溶液1~3天,利用高渗吸收组织中水分,减少组织含水量。
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问
分选后细胞死亡率较高,计数远小于流式仪计数,有什么方法能保持细胞活性。
txs900416
一般分选液中要加bsa以维持细胞活性,此外操作尽量在冰上,分选时间缩短,都可以增加细胞的活性
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问
冰冻切片做免疫荧光总是脱片怎么办?
txs900416
可以试一试把你切完的片子,晾干,用APES再浸泡一下子,再晾干,水洗三次,接着做,看一看能否不掉片子,此外也考虑一下OCT的原因,调整合适的温度
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问
Wb半定量怎么做,怎么标定?
txs900416
所谓的半定量,是将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量,得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量,再用此数值进行样品间的比较和分析,得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果,是一个比值差异的统计学分析。
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问
为什么ELISA实验中同一样本的复孔会相差很大?如何避免有这样大的差别?
师医生说
在酶联免疫吸附试验,同一样本的复测孔,如果是同一操作者,在相同的实验环境没有发生实验中的交叉污染时,是不会出现吸光度值相差很大的情况。在检测前,一定要对洗板机进行冲洗,另外要严格按照浓度配比进行洗液的配制,要用标准的微量加样器,手法标准的加样,要进行阴性对照,阳性对照和质控品的加样同一化加样。西板的过程也要注意加注洗液的高低一致,同时,拍板要干净,以防交叉污染
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问
请问为什么同一条带,每次涂显影液会出来趋势不一样的结果?怎么样涂才能使结果更准确?
txs900416
一般考虑是显影液涂抹不均匀,曝光时间不一导致。建议将胶浸泡入显影液几十秒,再拿出来曝光
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问
做ELISA时可以两个板只做一条标准曲线吗?
txs900416
除非两个板的特性完全一模一样,每孔之间操作和间隔时间都相同,不然尽量在两个板上分别作标准曲线
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问
悬浮细胞的免疫荧光选取抗体时最好如何做选择呢,可以直接做荧光标记吗?
dxy_gwrp7ndq
选取一抗时要来源于两种不同的动物,我用的是来源于 rabbit 和 rat 的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是 donkey anti - rabbit - FITC (绿)和 donkey anti - rat - Tex - Red (红)。可以直接标记
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问
间接法酶联免疫反应中如何控制二抗浓度?
dxy_gwrp7ndq
可以分别加入1:2000,1:10000,1:50000 二抗,进行滴定
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问
请问Elisa实验需要几个技术重复呢?
府宅
ELISA实验要重复三次,每个样本做两个复孔
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问
流式连续表达怎么画门?
txs900416
一般会设置对照组,例如荧光减一组,isotype同型对照组,这样根据这种对照组区分阴性表达的上限,这样可区分连续表达分子的阴性和阳性。
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问
请问使用辣根过氧化酶(HRP)标记时,是否在后续的封闭液不能加叠氮钠?
府宅
叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性,在含有辣根过氧化物酶的溶液中不可加入叠氮钠。
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问
wb怎么进行归一化,标定内参蛋白,如何确定上样量?
dxy_gwrp7ndq
你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”,然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量,再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体(内参抗体、目标蛋白的特异性抗体)孵育就可以很放心地做后续分析了。
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问
标本固定超过一个星期还有用吗?
府宅
标本放了一周能否使用,还与标本要做何种检查有关。若是做微生物学检查,活检标本放了一周则不能使用,因为微生物学检查需要保证活检标本的新鲜程度,放了一周的标本已经不够新鲜。如果是为了查病理或细胞学检查,不需要保证标本的新鲜程度,这时即使活检标本放了6天也能用。如果在取到标本当时及时进行了 固定处理,这种标本可以较长时间的进行保存,保留一个月是仍然可以用的。否则,组织细胞会很快发生溶解破坏,长时间的放置
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问
请问Elisa法检测细胞实验中细胞因子的浓度的原理是怎样的呀?
dxy_gwrp7ndq
细胞因子的ELISA检测常采用双抗体夹心的方法进行检测,采用抗同一细胞因子不同表位的两株单克隆抗体,或一个单克隆抗体和一个多克隆抗体。一个抗体用于包被作捕获抗体,另一个抗体标记酶,作为检测抗体。
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问
肝脏油红O的染色步骤
府宅
1. 油红O染色液的配制油红O染色液分储备液和工作液。①油红O储备液的配方:100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉,充分溶解,过滤,4度避光保存。②油红O工作液的配方:实验前,将储备液与蒸馏水按3:2稀释,过滤(滤纸或极性滤膜配1mL注射器),酒红色且无沉淀。现配现用原则,避免工作液出现沉淀。2. 60%异丙醇的配制60%异丙醇的配方:100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL,4度保存
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问
western blot 转膜及条带问题
dxy_gwrp7ndq
1.洗膜不充分,增加洗涤液的体积和洗涤次数;在洗涤液中加入Tween=20。2.二抗浓度过高,引起了一些非专一性的抗原-抗体相互作用,适当降低二抗浓度,可以分梯度进行。3.二抗的识别抗原免疫簇不唯一,这是因为二抗是多克隆抗体,使用单克隆抗体的二抗,此时二抗的识别抗原免疫簇是唯一的,其非专一性的抗原-抗体相互作用会大为减少。当然,有时,单克隆抗体也会有识别抗原免疫簇不唯一,如果两种蛋白质的抗原免疫簇
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问
染色最重要的操作步骤是哪个
bigred大红
样本前期处理和敷抗体都是关键步骤。
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