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问
表达蛋白的时候总是会出现内涵体,怎么避免这种情况呢?
小布丁瑶瑶
可以使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,可以避免出现内涵体。
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问
某一个抗体多次调整条件还是跑不出来,除了抗体本身的问题还可能是因为什么呢?
dxy_gwrp7ndq
可能原因及解决策略:1. 上样量较少,建议上到20ul-50ul看看;2. 分离胶改为12-15%;3. 提高一抗和二抗的浓度,建议提高1倍;4. 如有可能改为ECL法显色;5. 尽量使用分子量Marker来标记目的条带的正确位置.
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问
琼脂糖凝胶电泳实验,胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加吗? 做回收胶的时候,缓冲液都需要是新加入的吗
府宅
胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加,一般我们去取胶染料的时候温度就差不多降下来了,不用刻意等,胶凝固了也会影响后面的操作。做回收胶的时候,缓冲液都需要是新加入,电泳槽里的缓冲液全部换掉,防止胶回收时污染。
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问
免疫组化怎么估计抗体的使用量?
府宅
一个组织最多50ul抗体足够了。甚至更少20-30ul也可以,而且一抗还可以回收利用。
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问
跑出来的蛋白条带每一个呈现波浪锯齿形可能是哪些原因导致的呢?
dxy_gwrp7ndq
1、胶要凝得均匀,装胶时漏得厉害就不行2、电压不能太大3、样品中的盐离子浓度高,需脱盐。4、电泳缓冲液,胶缓冲液的PH值要对,最好是新配的
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问
动物实验脾脏单个核细胞悬液能存多久在-80中
府宅
-80可保存半年,液氮中保存一年复苏
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问
ELISA实验相关问题
dxy_gwrp7ndq
一般室温24h,但4度过夜确实是最好的,另外在平皿中摇似乎比封口膜更容易掌握井获得较好的效果
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问
重症肌无力大鼠实验的神经肌肉接头怎么定位
dxy_gwrp7ndq
α-银环蛇毒素(α-Bungarotoxin简称α-BT)与辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase简称HRP)结合物,对肌肉神经接头处N-乙酰胆碱受体的电镜定位方法
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问
为什么染色质免疫共沉淀的时候,抗体加多了反而免疫效率低了?
府宅
抗体过多,会使假阳性信号增多,影响免疫效率
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问
如何进行肿瘤组织免疫浸润分析?
dxy_gwrp7ndq
分析要点免疫基因集富集情况的比较免疫细胞评分比较免疫细胞类型在不同分组中对预后的影响免疫调节剂基因表达比较重要免疫特征分布分组比较
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问
肿瘤相关巨噬细胞表面标志物都有哪些?活化的肿瘤相关巨噬细胞,要看哪种标志物?
dxy_gwrp7ndq
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)标志物包括CCR2、CSF1R、MARCO、PDL2、CD40、CCL2、CSF1、CD16和PDGF beta
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问
wb如何才能把内参蛋白条带跑直?
dxy_gwrp7ndq
1.分离好蛋白上清,在加Loading buffer,ddH2O前药先把金属浴仪器打开,使其尽快达到预定温度。然后快速于每个蛋白样品中加入LB和水。这样可防止蛋白的继续降解。2.蛋白上样时,样品要混匀,特别是做CO-IP实验蛋白样品中含珠子的一定要充分混匀3.药物或其他外界因素:使用影响围观蛋白的药物作用细胞,如长春新碱、紫杉醇等不要用tubulin蛋白;在做缺氧相关实验时不要用GAPDH;有些药
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问
动物组织的切片做免疫荧光出现严重的非特异性染色的原因是什么?
府宅
原因:1.抗体分子上标记的荧光素分子太多,这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子,可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。2.荧光素不纯,标本固定不当等。
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问
chip-seq实验相关问题
dxy_gwrp7ndq
ChIP实验中的抗体对于特异性、亲和力、效价都具有较高要求,能够成功用于WB、IHC等实验的抗体并不确保能成功运用于ChIP,因此需要选用经过ChIP验证的商品化抗体,这类抗体常会标明ChIP grade。关于单抗和多抗。单抗具有特异性优势,但风险在于其识别表位可能恰好被掩蔽(DNA或交联环节),而多抗可识别多个表位可基本避免该风险。因此单多抗各有优缺点,应重点关注该抗体是否经过ChIP验证。
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问
western blot实验相关问题
dxy_gwrp7ndq
背景深、杂带多原因:1、一抗浓度高了;2、封闭时间短了;3、孵育完二抗之后洗脱时间短了;4、你的蛋白有没有其他亚型;5、你的一抗来源本来就有问题,买之前说明书上面杂带多么。
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问
求教大家一个问题瓶口刻度
师医生说
在实验过程中,注意容量瓶的选择是很重要的,要根据自己液体容积的多少,采用微量加样器或者是量桶。眼睛要平齐液体凹液面,同时,要避免在光线不良的情况和有折射的环境中进行。实验员有同伴的情况,最好是取平均值更为准确
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问
免疫组化,切片出现断裂,是什么原因呢?
小布丁瑶瑶
透明时间过久容易导致断裂,可根据组织透明情况来使用二甲苯透明,另外试剂还是需要定期更换的
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问
问:标本流水冲洗可以超过24h吗?
师医生说
标本的流水冲洗在染色步骤中至关重要,要尽可能的控制水压和注意评估流水的酸碱度,在保证,均匀的流出情况下,有很好的分化和反蓝作用,是可以适当延长时间的
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问
小鼠肝细胞PCR怎么测?
彭文彬
可取米粒大小肝脏,提rnd逆转录!
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问
免疫组化染色怎样做效果更好?
LFF520宣城
为达到免疫组织化学技术的要求,组织固定越新鲜越好;组织脱水必须彻底干净;切片必须完整、均匀、平展、无邹折;切片的附贴必须牢固,必须使用合适的粘贴剂;切片必须烘烤附贴牢固,既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片,又不至于破坏抗原;切片脱蜡必须干净,否则将会影响免疫组化染色的最后结果。
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