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实验问答

31,561,140 科研人在看

问nlrp3炎症小体激活后贴壁不牢，免疫荧光染色会冲掉怎么办？

府宅

洗的时候注意冲洗力度，如果吸头直接对着细胞并且吹打力度过大，的确能把细胞吸吹下来，尽量避免头直接对准细胞吧，建议贴着孔的侧壁加液体

3 回答768 围观

问利用WB检测asc寡聚化

dxywode

一般做蛋白的寡聚化，用交联的方法，可以分为In vivo 和in vitro两种情况。in vivo：用Cross－linker（such as DTSSP)处理细胞一定时间，如果你的蛋白是寡聚体形式存在，它可以把你的四聚体交联在一起，那么用不含DTT的裂解液收集细胞，然后跑胶，western，你可以看到在分子量4倍的地方有条带，设好各种对照，你可以判断出那是不是你的四聚体形式。这里就讲个原理，具

2 回答6380 围观

问想问一下大家有观察过PCMV6表达载体和PCDNA3.1表达载体的表达效率差异吗？大概有多少倍呀？

txs900416

这两个载体都是高拷贝载体，表达也都是CMV为启动子，差异不大啊

1 回答784 围观

问新型冠状病毒康复后会有自身免疫嘛？

dxywode

新型冠状病毒肺炎的患者恢复后体内产生了抗体，这些抗体的滴度随着时间的推移，也有可能会逐渐的减弱，甚至是消失。所以对于既往有新型冠状病毒肺炎的患者，仍然需要采取措施加强防护，预防再次出现感染。

4 回答744 围观

问免疫疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些

dxy_gwrp7ndq

主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

2 回答1799 围观

问做实验需要的抗体如何制备？

府宅

抗体制备要点：1.这个抗体用来做什么实验(ELISA、IHC、Western Blot、IF或者IP等)?（功能性要求）2.是否已有商品化的抗体可以满足以上功能需求?（便利性要求）3.抗体需要什么种属来源（兔子、山羊、大鼠或小鼠等）?（抗体属性要求）4.需要多抗还是单抗?（品质性要求）；5.已具备的抗原信息或材料（抗原信息或材料：CDS序列，重组质粒，重组蛋白、多肽等）?（可能性要求）；6.是否可

3 回答1780 围观

问免疫共定位结果怎么分析？

君君子丶

不需要建立text,直接将网页上的代码ctrl+a(全选)→CTRL+C复制到剪切板就行。在image J 中Plugins→new→在打开的页面中ctrl+V→左上角 file→save as(保存在你能找到的地方就行) 再回去，Plugins→macros→install 找到你刚才保存的文件，打开即可。你就会发现image J下面多了右侧这个血管的图标。

1 回答866 围观

问elisa实验有哪些步骤需要特别注意的呢？

dxy_gwrp7ndq

1.要注意在包被时：①板孔的选择：ELISA级别的微孔板②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。2、注意在封闭时：①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性

3 回答949 围观

问为什么wb跑的条带好几条都是波浪装？分子量47 上样量30ug

府宅

1、上样体积过大可以导致，设法减少体积（提取蛋白同样条件下减少裂解液）。2、胶配的有问题，“越靠近下部越明显”说明你的胶不好。如果你在收胶的时候仔细看（把玻璃板表面去离子水洗干净）会发现下部有波浪状，即胶凝的不够均匀，自然会出现波浪状条带了

3 回答736 围观

问宫颈上皮内瘤变CIN2，免疫组化p16、ki67(-)应该诊断为？

dxy_gwrp7ndq

P16和Ki67的阳性程度，判定方法是这两者阳性占宫颈上皮的多少，如果P16和Ki67阳性都超过鳞状上皮2/3层，那么就是高级别病变，若是两者只是阳性不超过1/3就是低级别，要是都是基底阳性就是正常的。宫颈上皮内瘤变CIN2，免疫组化p16、ki67(-)，就可以诊断为低级别宫颈上皮内瘤变

2 回答565 围观

问请问如何更好的封闭非特异性蛋白？但是对目标蛋白没有影响。跑出来的条带总是有杂带或者背景不干净，除了封闭，还应该优化哪些步骤？

府宅

Western blot结果中杂带较多可能的原因及建议：目的蛋白有多个修饰位点（磷酸化位点、糖基化位点、乙酰化位点等），本身可以呈现多条带。查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小。目的蛋白有其它剪切本——查阅文献或生物信息学分析可能性。样本处理过程中目的蛋白发生降解——加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作。上样量过高，太敏感——适当减少上样量。一抗特

2 回答331 围观

问请问如何对条带的结果定量能更贴近真是的表达量？定量时，不同泳道的蛋白需要用同样大小的圈吗？

dxywode

不能严格定量，只能互相比较。无论什么染色法，条带亮度会随着染液多少及染色时间的不同而变化，无法严格定量。 page的作用更多的是看目的条带的大小，以及两个样品中相同蛋白互相比较多少。不能精确算出是多少ug或ng。

1 回答212 围观

问ELISA显色失败都有什么原因？

dxy_gwrp7ndq

失败原因：1.包被原：包括你的包被液有无问题，有没有配错。包被原一般加100微升，37度2小时； 2.封闭：封闭液用的是否适合？你说做了几次都没显色，空白孔也不显吗？如果空白也无颜色，那封闭就没有问题。一般封闭是200微升每孔，也可以满孔封闭 3.一抗：检查你的一抗是否失效。是否是在37度反应 4.二抗：底物，底物缓冲液……这些都要好好检查！ 5.洗涤：用PBST洗涤，包被和封

4 回答3203 围观

问红色蛋白使用什么拷贝数的质粒可以更好的显色？

txs900416

取决于表达及细胞毒性之间的一个平衡，之前一些红色蛋白易形成多聚体且有细胞毒性，所以表达多的容易导致细胞死亡。后来经过改进这些红色荧光蛋白毒性都减弱了，一般来说对于稳转株拷贝数高低无所谓，对于瞬转还是建议用高拷贝质粒

1 回答480 围观

问Th10和Th17如何诱导？

bqejjh123

你可以分别采取以下3种方法体外诱导Th17细胞:①给予CD3及CD28抗体刺激,并在培养体系中加入白细胞介素6及转化生长因子β,培养3d.②在方法①的基础上加入白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α,培养3d.③在方法②的基础上第3天洗去细胞因子,培养2d;再次给予CD3及CD28抗体刺激,并在培养体系中加入白细胞介素23,培养3d.

1 回答708 围观

问免疫共沉淀的方法更适用于检测哪种物质？对于样本需要怎么样的处理？新手应该注意哪些方面？需要用到的仪器是哪些？

Kimser

适用于：检测兴趣蛋白质，样本：需要加入细胞裂解缓冲液也就是蛋白酶抑制剂，新手注意：每种细胞裂解条件不同，如果没有人带你，可以做对照实验，还有就是注意不要用太多，多看看说明书要求，注意避免污染仪器：离心机，ep管，离心管，电泳仪，电泳槽，色谱仪，刮刀等

2 回答620 围观

问免疫荧光可以染两种抗体吗？

dxywode

当两个抗原都表达在胞浆中，行免疫组化双染时染色容易相互覆盖。此时可以用免疫荧光双染，当然可以在同张片子上进行，具体操作时先使用一种荧光进行着色后立即拍照，然后等荧光消失后再染另一种荧光染色，选择相同视野拍照，这样也有说服力的。

3 回答4282 围观

问做小鼠细胞因子测定实验后多久抽血比较好

txs900416

一般在损伤高峰测，比如Con A注射的小鼠，肝损伤在8-12h，这期间收是没问题的。测血清中细胞因子主要是要检测试剂盒的检测限足够灵敏，另外要每次设置阳性阴性对照，这样可以有效进行比较。

2 回答893 围观

问除了空气过滤系统，还有可靠的去除核酸污染清洁剂吗？

府宅

对可疑器用稀酸进行擦拭或浸泡，紫外线照射，对反应液用DNaseⅠ或内切酶进行处理等方法。

3 回答730 围观

问基础实验的结果和临床观察不一致，容易发文章吗？

陈文豪平邑

不容易，临床医生在临床试验的设计和实施过程中扮演重要角色，同时，临床医生、临床试验方法学家、临床试验管理专业人员通力合作，才能确保临床试验的高质量设计、实施、分析和报告。

9 回答1899 围观

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