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        请问在做western blot,IF,IHC等实验中,二抗可以用鼠二抗吗?

        相关实验:免疫印迹与免疫检测实验

        user-title

        齐天大圣还是个宝

        如果可以用,需要做哪些补充实验来排除非特异性结合呢?

        wx-share
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        3 个回答

        user-title

        府宅

        有帮助

        可以使用鼠二抗,疫学试验中常通过封闭试剂来封闭未吸附蛋白的固相载体部位,以减少非特异性结合背景的影响。如WB 试验中常用5% 脱脂奶粉或者BSA 封闭膜上除转印蛋白占据的其它部位。除了用于封闭未吸附蛋白的固相载体,封闭试剂也被广泛用于封闭其它非特异性结合。如IHC、IF 等试验中,特异性抗体与样本中Fc 受体的结合,以及在IHC 和IF 双染或三染实验中,驴血清也被广泛用于封闭试剂以减少抗体之间的非特异性结合;另外,Fab 片段单链二抗也被用于荧光双染中的有效封闭。

        user-title

        txs900416

        有帮助

        可以的,一抗使用的是鼠来源的抗体,二抗就可以用鼠二抗,主要是要做isotype,即一抗染色时只染相同来源的igg,其余都相同,可观察到染色背景

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        可以使用,为减少二抗与样本的非特异性结合, 可以使用血清吸附的二抗

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