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问
请问elisa实验中37℃孵育时,是放水浴锅还是恒温箱比较合适?
txs900416
水浴锅和恒温箱的区别在于湿度不同,理论上水浴锅可以防止液体挥发,但存在的问题是水浴不容易放稳,建议将elisa酶标条放湿盒中再放恒温箱以减少挥发
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问
我想请教一下ELSIA实验中结果阴性、阳性对照显色差距较小怎么办?
dxywode
可能原因:稀释不准、加样量不准。加样时各孔均被污染;底物不新鲜,配制时间过长或被污染;试剂效价下降或超过了试剂的有效使用期;配制溶液的水质有问题。
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问
组合应用免疫抑制剂+人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)能否治愈狂犬病?
dxywode
这些只是实验结果,还只是很小的研究进展,毕竟距离应用到人类临床研究,犬类的动物实验都可能与小鼠具有不同的结果。但毕竟指示了狂犬治疗的可能性,推动了一个方向的发展。
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问
小鼠外周血少量免疫细胞怎么测定?
txs900416
小鼠外周血少,全取后要尽量用淋巴细胞分离液分离再做进一步检测,又损失了很多细胞,还要进行pma/ion/bfa联合刺激,细胞又会损失。建议取小鼠脾脏进行实验,可获得较多的淋巴细胞。
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问
免疫细胞流式分析,含量少的亚型怎么检测呢?
txs900416
看楼主使用的是什么活化模型,一般th1介导的模型就容易染出th1。此外,最好要用pma/ion/bfa联合处理细胞4-6h,才能让t细胞发挥出最大潜力,容易检测到th1/2/17/treg的分化
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问
96孔板,细胞洗板,枪头怎么不戳破细胞层,还能将培养液吸干
府宅
把细胞培养基靠一侧吸出来,尽量减少与板底部的接触,然后还要加pbs或者培养基洗2次,洗残余的药物(细胞未摄取的药物)
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问
96孔细胞板洗板,细胞老是萎缩或者没了
dxy_gwrp7ndq
可以用排枪轻微吸打,然后再把细胞培养基靠一侧吸出来,尽量减少与板底部的接触,用吸水纸吸一下
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问
免疫组化的切片相关问题
府宅
冰冻切片相比较于石蜡切片简单易行,一般进行固定脱水后,固定于包埋剂就可以在冰冻切片机进行切片。有些新鲜标本可以直接取材后,冷冻托涂包埋剂后置于冷冻托上速冻,冻好后立即切片。冰冻切片最重要的是防止样品中冰晶的出现,一般可以通过速冻的方法使组织温度骤降,减少样品内冰晶的形成。也可以将组织置于20%~30%蔗糖溶液1~3天,利用高渗吸收组织中水分,减少组织含水量。
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问
分选后细胞死亡率较高,计数远小于流式仪计数,有什么方法能保持细胞活性。
txs900416
一般分选液中要加bsa以维持细胞活性,此外操作尽量在冰上,分选时间缩短,都可以增加细胞的活性
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问
酶联免疫吸附试验相关问题
dxy_gwrp7ndq
1、要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量不准,造成显色不统一,判断错误。2、显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下,加显色系统后要避光反应,显色液量不能过多,以免显色过强。3、试剂的影响因数:应选用有国家批准文号,质量靠得住的产品,不能图便宜,忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内,在使用时先平衡至室温,不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂
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问
冰冻切片做免疫荧光总是脱片怎么办?
txs900416
可以试一试把你切完的片子,晾干,用APES再浸泡一下子,再晾干,水洗三次,接着做,看一看能否不掉片子,此外也考虑一下OCT的原因,调整合适的温度
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问
chip-seq相关问题?
dxywode
你可以可以试试抗体可以多加点,加到4ug。阴性对照有条带是正常的,属于背景,关键是相对于目的抗体条带很弱才行。建议你做一个阳性chip实验证实你的体系没问题以及抗体没问题然后确定是否你的chip实验结果可信。希望能对你有帮助!
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问
Wb半定量怎么做,怎么标定?
txs900416
所谓的半定量,是将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量,得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量,再用此数值进行样品间的比较和分析,得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果,是一个比值差异的统计学分析。
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问
为什么ELISA实验中同一样本的复孔会相差很大?如何避免有这样大的差别?
师医生说
在酶联免疫吸附试验,同一样本的复测孔,如果是同一操作者,在相同的实验环境没有发生实验中的交叉污染时,是不会出现吸光度值相差很大的情况。在检测前,一定要对洗板机进行冲洗,另外要严格按照浓度配比进行洗液的配制,要用标准的微量加样器,手法标准的加样,要进行阴性对照,阳性对照和质控品的加样同一化加样。西板的过程也要注意加注洗液的高低一致,同时,拍板要干净,以防交叉污染
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问
请问为什么同一条带,每次涂显影液会出来趋势不一样的结果?怎么样涂才能使结果更准确?
txs900416
一般考虑是显影液涂抹不均匀,曝光时间不一导致。建议将胶浸泡入显影液几十秒,再拿出来曝光
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问
做ELISA时可以两个板只做一条标准曲线吗?
txs900416
除非两个板的特性完全一模一样,每孔之间操作和间隔时间都相同,不然尽量在两个板上分别作标准曲线
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问
悬浮细胞的免疫荧光选取抗体时最好如何做选择呢,可以直接做荧光标记吗?
dxy_gwrp7ndq
选取一抗时要来源于两种不同的动物,我用的是来源于 rabbit 和 rat 的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是 donkey anti - rabbit - FITC (绿)和 donkey anti - rat - Tex - Red (红)。可以直接标记
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问
关于间接免疫荧光检测凝集素途径激活
dxywode
凝集素补体途径是补体激活的途径之一,由血浆中甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)直接识别多种病原微生物表面的N-氨基半乳糖或甘露糖,进而依次活化MASP-1、MASP-2、C4、C2、C3,形成和经典途径相同的C3与C5转化酶,激活补体级联酶促反应的活化途径.MBL激活途径的主要激活物为表面含有甘露糖基、岩藻糖和N-氨基半乳糖的病原微生物.
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问
肝脏油红O的染色步骤
府宅
1. 油红O染色液的配制油红O染色液分储备液和工作液。①油红O储备液的配方:100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉,充分溶解,过滤,4度避光保存。②油红O工作液的配方:实验前,将储备液与蒸馏水按3:2稀释,过滤(滤纸或极性滤膜配1mL注射器),酒红色且无沉淀。现配现用原则,避免工作液出现沉淀。2. 60%异丙醇的配制60%异丙醇的配方:100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL,4度保存
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western blot 转膜及条带问题
dxy_gwrp7ndq
1.洗膜不充分,增加洗涤液的体积和洗涤次数;在洗涤液中加入Tween=20。2.二抗浓度过高,引起了一些非专一性的抗原-抗体相互作用,适当降低二抗浓度,可以分梯度进行。3.二抗的识别抗原免疫簇不唯一,这是因为二抗是多克隆抗体,使用单克隆抗体的二抗,此时二抗的识别抗原免疫簇是唯一的,其非专一性的抗原-抗体相互作用会大为减少。当然,有时,单克隆抗体也会有识别抗原免疫簇不唯一,如果两种蛋白质的抗原免疫簇
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