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        怎么设计实验用CO-IP(CO-Immunoprecipitation)验证两个蛋白是否互作呢?

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        dxy_b8wo7oke

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        2 个回答

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        txs900416

        有帮助

        最基本的方法是用ip级别的抗体钓取一个蛋白,跑wb检测是否钓取的蛋白中是否有另外一个蛋白的存在。如果没有ip级别的抗体,则需要在细胞系中共表达两个蛋白,使得其中一个带tag(例如his,ha,flag等),使用抗tag的抗体钓蛋白,检测另一个蛋白,从而验证蛋白是否互作

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来,假如细胞内存在XY蛋白复合物,用X(X也称为诱饵蛋白)的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y(Y也称为靶蛋白)也被沉淀下来。因此在细胞裂解液中加入X的抗体沉淀蛋白X,随后利用蛋白印迹(western blot,WB)检测沉淀中是否存在蛋白Y,如果存在,则说明细胞内存在XY蛋白复合物,即蛋白XY存在相互作用。

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