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问
外泌体的生物记物是什么?
bamboopiggy
1.电镜检测:茶托型或一侧凹陷的半球形2.Western blot分子标志物检测:外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;细胞质蛋白,如肌动蛋白(Actin)和钙磷脂结合蛋白(Annexins);参与生物功能的分子,如凋亡转接基因2互作蛋白X(ALIX)、肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90),以及细胞分泌的特异性蛋白
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问
在封闭缓冲液中加入人表面活性剂,如何选择合适的去污剂?
bqejjh123
好的去污剂首先应该能够充分裂解细胞,溶解其中的蛋白,并对后续的实验研究没有影响。对于想要得到保留天然构想的还是变性的蛋白质,这才是第二考虑的问题。没有一种去污剂可以适用于所有的实验研究,即使应用于同一种实验技术,去污剂效果的好坏还取决于实验所分离的蛋白质(表格1)。因此,通过尝试和失败经验,可以帮助我们找到最合适的去污剂,此外,还可以尝试使用去污剂的混合物。需要再强调的是,配置新鲜的去污剂缓冲液也
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问
DNA在什么条件下保存?
whilt-shirt
一般是-80℃保存,但是短期内用完的话可以放4℃
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问
DNA提取的要求是什么?总是实验失败,大家告诉一下
whilt-shirt
主要是无菌操作,尽量选用进口的试剂盒
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问
如何更好的进行免疫细胞的激活和分化?
dxy_gwrp7ndq
可以利用免疫细胞激活培养基将单个核细胞置于所述包被后的培养容器中,以便得到激活的免疫细胞。也可以加入活化液(刺激因子)进行激活
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问
Western Blot实验,条带信号弱,难以分辨,怎么改进呢
whilt-shirt
加大上样量或增加上样浓度,更换新抗体或加大抗体浓度
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问
白色脂肪组织是由于那些因子而可以转化为棕色脂肪组织的呢
bamboopiggy
FGF21、PGC-1α、UCP1、PRDM16、ATGL、AMPK、PPARγ、脂连素等,都会促进白色脂肪棕色化。你可以直接找个综述来看看。
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问
Western Blot杂带太多的原因是
今天摆烂了咩
杂带多的原因——上样量过高,蛋白样本降解,蛋白本身有多个修饰位点,抗体未纯化,一抗浓度过高,洗涤不完全,封闭不好等都可能导致杂带产生。
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问
跑带,条带上有圆形的白孔?
岳努力岳幸运
感觉像是湿转的wb。最可能的原因是在转膜操作的时候,SDS-PAGE胶和pvdf或者nc膜中间有小气泡。在电转液中将夹板里的海绵和滤纸都充分浸湿,而且电转液的量应该足够淹没膜,把胶放在膜上的时候沿着一边放下去,可以轻轻刮排气泡。最后把滤纸海绵都盖好后,为了万无一失,最好用圆管在上面滚一滚充分排出小气泡!
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问
免疫荧光我想染3种蛋白,需要准备哪些?抗体和试验鼠。
whilt-shirt
需要对应的抗体,相关的试剂,除DAPI以外的三种波长的二抗
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问
如何更好的设计RNA引物?
bamboopiggy
1.根据文献,尤其是高分文献发表的引物。2.可以用公司网站提供的序列,尤其是thermo公司的。3.primerbank直接搜
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问
如何提高蛋白质提纯效率?
whilt-shirt
采用进口的专用试剂盒会提高提纯率
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问
死细胞对rna提取有影响吗
whilt-shirt
死细胞影响不大,在提RNA过程中主要还是看活细胞
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问
为什么转膜之后用TBST越洗越淡?
桐轩456
我觉得你如果用TBST洗5min*3次,封闭敷抗体,密闭室温改为2小时去试试。
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问
如何减少微生物实验操作的霉菌污染?
师医生说
有霉菌生长就会导致微生物生长的失败。首先保证实验室温,湿度。最好设置温控系统进行监控。同时高压灭菌后保持容器干燥。在生物安全柜内熟练进行操作。在操作前,要对生物安全柜进行至少40分钟的紫外线消毒和压力正常的条件下进行。
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问
qpcr实验每次平行的扩增曲线都相差很大,怎么解决?
bamboopiggy
1.保证样品融化完全,混匀,且用同一个白枪尖上样。2.保证qpcr mix和引物及水混匀良好。3.复孔之间上样后,高度一致,4.盖好膜,扩增完成后,复孔的高度还要一致,没有蒸发
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问
请问大家都是怎么做小分子抑制剂找通路或者靶点的?最佳使用浓度怎么确定?
bamboopiggy
现在可以通过买一些公司的药物库,直接高通量筛选,有用的小分子药物。一般是高通量10um的药物浓度,筛出有用的小分子化合物以后。再扩大浓度梯度,找到合适的浓度,至于小分子药对应的靶点,一般文献里,或公司给的说明书里会有,selleck应该就有这样的药物库
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问
跑WB被上样的针尖戳了,其上的肿瘤蛋白会对人造成危险吗
bqejjh123
一年前的时候跟同学做他的小鼠荷瘤实验,操作中老鼠没拿稳同学慌了自己扎了一下左手鱼际,就是用注射腹水瘤的针头,当时大家都很紧张,讨论这个问题会不会把肿瘤移植的自己身上来。肿瘤移植我做过不少,昆明小鼠和裸鼠都接种过,一般来说成瘤率100%,个别没有成瘤的怀疑是操作有误。但从来没有人在自己身上做这个实验,也没试过是否那样的针头(注射过或者抽吸有细胞悬液的针头)扎一下自己后果怎样。从理论上来讲(肿瘤的血道
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问
怎样提高免疫发光实验的效率?
wuli猫宁
一、细胞密度1、保证玻片上的细胞以单层细胞生长2、细胞生长速度3、保证爬片是无菌的二、孵育抗体1、一抗浓度过高;2、一抗孵育之后洗涤不充分;3、一抗特异性不高,这时候你要考虑这个蛋白是细胞本身就表达的还是转入的质粒表达的; 4、可以查一下抗体识别序列,看看是否有同源性的蛋白。三、DAPI复染细胞核四、封片
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问
蛋白质定量实验原理?
君君子丶
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在丐界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改迚而成。二价铜离子在碱性的条件下、可以被蛋白质还原成一价铜离子。biuret reaction。 、一价铜离子和独特的BCA Solution A、含有BCA,相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子。形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸
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