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实验问答

31,572,149 科研人在看

问为什么提取RNA的时候一定要分层？如果不用分层就能提取出RNA，这样在吸取含有RNA的水相时就不怕污染了。

whilt-shirt

提RNA过程中分层是因为加入氯仿，氯仿会从trizol中萃取RNA，在吸上层的时候可以考虑不完全吸掉。如果经费充足的话可以考虑柱法提RNA，这种方法污染小。

3 回答1794 围观

问EMSA实验为什么shift有两条带

whilt-shirt

1）曝光或者成像时间过长。2）封闭时间不足或者效率不高。3）洗涤效果不佳。4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。

3 回答2172 围观

问如何高效的向原代细胞转染SiRNA？转染试剂？转染时间？

bqejjh123

　选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验有很大影响，它直接影响实验的结论和结果，因此必须选择低毒性转染试剂，以观察转染试剂的毒性是否较低。有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要求的细胞密度越大，说明毒性越大，

3 回答1701 围观

问如何提高纯度，试剂盒过柱提取结果不太理想

whilt-shirt

加洗涤液多洗几遍，多过几次柱子试试。

3 回答837 围观

问Qupath软件的使用方法？

bamboopiggy

我没有用过这个软件，但是看你提了，我好奇是个什么软件，原始链接在这里，你可以直接点链接去看看：https://blog.csdn.net/qq_40662074/article/details/104968297这个帖子包含了以下内容：软件安装软件下载软件安装【windows版】简单使用文件打开人工标注标注导出和导入几个重要的官方说明书

3 回答5299 围观

问做WB提取膜蛋白时有什么注意事项？

dxy_gwrp7ndq

电转印膜的选择：有NC膜、重氮化膜和阳离子尼龙膜，PVDF膜。其中NC膜使用的最为普遍，它的蛋白质容量大，可用各种染色方法进行检测，但是它与蛋白质的结合是非价性的，膜干燥后很脆。此外膜的孔径大小也是考虑的重要因素，目的蛋白30KD以下用0.22 um孔径的NC膜，30KD以上用0.45 um孔径的NC膜；转印选择恒流，每个转印槽150 mA，10KD以下转印40min，10-30KD转印50min

3 回答1517 围观

问蛋白质粉的定量测定实验步骤

wuli猫宁

蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一目前常用的有两种古老的经典方法，即酚试剂法和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法。其中酚试剂法和考马斯亮蓝法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍。。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花

3 回答989 围观

问请教各位大神，WB条带过浅有什么补救的办法吗，后期可以调得清楚些吗😭😭

府宅

1：你的蛋白的量的多少，要保证一定的蛋白总量2：转膜的参数设置：100mA,4小时，冰浴3：背景太深，是不是你的二抗浓度太高以及洗膜的时间不够，15分钟/次，共1小时

3 回答732 围观

问为什么Wb 转膜会出现白板？

府宅

排除蛋白问题，抗体问题，再出现大白板很有可能就是转膜的问题了，试试改变一下转膜条件，转膜完成以后用丽春红染个膜大概看看转膜效果

4 回答982 围观

问免疫介导的需求量到底有多少？

dxywode

疫情推动下免疫球蛋白市场需求量攀升。16年，静丙批签发维持较高增速，分别达到19.8%、32.7%和25.2%，2017年和2018年批签量分别下滑0.3%和3.5%，2019年静丙签发量增速达9.2%。

1 回答1100 围观

问病毒反向遗传操作的比例是如何确定的？

dxywode

RNA病毒的反向遗传学操作是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入的DNA环节,实现了在DNA水平上对RNA 病毒基因组的人工操作,在深入阐明病毒基因组结构与功能、发展新型病毒载体,尤其在研制筛选候选疫苗株等方面有很好的应用前景.用PBS液洗3次，按照1:6比例。

1 回答697 围观

问细胞膜的两种提取方法？

bamboopiggy

1.对于水溶性的细胞膜蛋白，可以采用反复冻融的方法，但是对于疏水蛋白就需要用到去垢剂，所以如果方便最好还是用低渗的方法提取，因为里面直接加了去垢剂。2.细胞破碎仪是会产热，但是你可以将你样本管放在冰水浴中，然后再用破碎仪震破细胞，这样基本不会影响蛋白。以上两种意见如果不放心，最好先做一个预实验，试一下，那种方式对你来说合适。

3 回答10844 围观

问以EDC和NHS做催化剂，TPGS-COOH和4-NH2－Tempo为原料，二者发生酰胺反应。

丁香粉猪猪

ph值4缓冲液体中，反应48小时室温

3 回答1283 围观

问细胞分选单克隆之后一般多少天能长起来呀？

丁香粉猪猪

干细胞填充后，通常需要3-4周开始增生，3个月左右达到最佳效果。

3 回答1151 围观

问E.coli表达His-tag蛋白有哪些操作注意事项？

岳努力岳幸运

1.蛋白纯化的条件：首先，看一看这个蛋白在文献中有没有纯化过，可以参考。如果从来没有人纯化过，除了提到的诱导剂浓度，温度和时间，其实裂解蛋白的buffer更重要一些，根据蛋白的等电点看一看酸碱，根据蛋白是否容易沉淀看盐浓度，根据蛋白是否稳定看蛋白酶抑制剂和还原剂…除了buffer还有wash buffer和elute buffer中咪唑浓度也挺重要的。2.如何看蛋白分子量：把测序结果从起始到终止的

3 回答1337 围观

问病毒感染和CRP的关系是什么，降低是不是就算愈后良好？

府宅

在病毒感染时，没有显著提高，通常≤50mg/L，如果 CRP 值显著下降，证明疗效良好。

4 回答2009 围观

问导致实时荧光定量 PCR 效率低有哪些原因？

dxy_gwrp7ndq

1. PCR反应性能差。引物、试剂、PCR条件的再摸索。优化反应条件，或者重新设计PCR引物。2. PCR阻害物质的混入。模板提取方法的再摸索。3. 标准品稀释不准确。使用专用标准品稀释Buffer。

4 回答1443 围观

问怎样保证细胞裂解充分从而保证全部DNA被提解出来

bqejjh123

建议可以用热休克法和超声波处理法

3 回答963 围观

问玻片制备如何提高准确率

bqejjh123

注意仪器校正，具有准确体积的和质量的仪器，如滴定管、移液管、容量瓶和分析天平砝码，都应进行校正，以消除仪器不准所引起的系统误差。

2 回答522 围观

问请问一下，有人做过羧化的TPGS与TEMPO发生酰胺反应吗？我采用的是EDC做催化剂，DMSO做溶剂，不知道为啥合不出来?

dxywode

根据反应的机理，是edc和hobt先和酸反应，然后是胺进攻而生成最终的产物酰胺。我认为最好是先加rcooh和edc、hobt让他们反应半个小时后。再加入胺。你也可以加点dmap，我认为它一方面是催化剂，另一方面它也起到了提供碱性的作用。我们实验室的经验是1当量酸+1当量edc+0.5当量dmap+1当量hobt，反应半小时后加入1.2当量胺，然后室温搅拌tlc跟踪反应。这种类型的反应有的几个小时就

2 回答938 围观

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