如何收集带flag标签的蛋白？
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收集蛋白
我的实验目的是想收集带Flag标签的蛋白，打算是想先做质粒稳转293T细胞，然后收集带Flag标签的表达蛋白，
现在手头上没有带Flag的质粒，想咨询一下用什么质粒比较好，
另外我想自己设计一段Flag序列，加到我目的基因的前面，但别人说尽量别自己构建标签，不知道该怎么办了。（因Sigma的Flag-CMV-10带的Neo抗性，293T基本对Neo无感，所以想换个抗性的，能在293T里做出稳转的。）？
3 个回答
wuli猫宁
有帮助
可以参考本链接，个人认为讲的很全面。【Flag 、HA、GFP标签蛋白纯化介绍】https://mr.baidu.com/r/CYK6W8o4ko?f=cp&u=6f9e5f2331512afd
whilt-shirt
有帮助
FLAG-标签指一段由8个氨基酸残基组成的。Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的Flag标签抗体也被广泛应用。
由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。Flag标签可以通过加入肠激酶处理去除，肠激酶专一识别该肽序列C末端的5个氨基酸残基。
如果是第一次做的话，建议购买公司的成品。
dxy_gwrp7ndq
有帮助
一般用FLAG标签抗体偶联介质或者磁珠进行蛋白纯化
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