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跑带,条带上有圆形的白孔?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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Eason老歌迷

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5 个回答

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岳努力岳幸运

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感觉像是湿转的wb。最可能的原因是在转膜操作的时候,SDS-PAGE胶和pvdf或者nc膜中间有小气泡。

在电转液中将夹板里的海绵和滤纸都充分浸湿,而且电转液的量应该足够淹没膜,把胶放在膜上的时候沿着一边放下去,可以轻轻刮排气泡。最后把滤纸海绵都盖好后,为了万无一失,最好用圆管在上面滚一滚充分排出小气泡!

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Lv花开花落

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1.样品处理问题。样品纯度差,跑DNA电泳时有杂质蛋白污染(琼脂糖的话可以在紫外光下检查上样孔是否有白色亮团);样品上样前已有部分程度的降解(拖尾)。
2.试剂问题。凝胶要配好一点(尽量用新鲜的试剂,新鲜配制后即电泳),胶的浓度把握到位。

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whilt-shirt

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考虑转膜时出现气泡导致的,可以在转膜结束后使用丽春红染一下看看转膜情况

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dxy_gwrp7ndq

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原因:电转中膜和胶之间存在气泡。

解决办法:转膜前去掉膜和胶之间的气泡

经验:我们常常将电转液倒入一个盘子里,倒入的液体不能太多也不能太少,最好的高度是与放上第一层滤纸齐平,然后往滤纸上浇点转膜液,把电泳胶用清水清洗下,将电泳胶平铺到滤纸上,仔细检查滤纸与胶之间是否有气泡,可以左右前后观察,不同方向观察之后确认无气泡,然后再往胶上面浇点电转液,用两只手的拇指和食指轻轻夹住PVDF膜的两侧中间,使膜成U型,然后将U型的底部接触胶的中间,慢慢往两边放下膜,这样一般气泡很少。然后上层滤纸同样用U型的放置方法,用玻璃棒稍微贴实下,然后盖上海绵。注意不要来回赶气泡,这样反而会带入气泡。

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dxywode

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转膜的时候没将气泡赶干净、孵育抗体接触不良(孵育盒中放太多张膜、抗体液体中有气泡)

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