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        免疫荧光细胞化学双重染鱼法中,两种一抗在混合稀释时怎么保证最终浓度?

        相关实验:免疫荧光技术

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        桐轩456

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        3 个回答

        user-title

        dxywode

        有帮助

        进行双重染色时,由于两种一抗种属来源不同,可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗,滴加二抗时,先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育,洗涤后,滴加SABC-Cy3复合物,经荧光显微镜下观察已出现特异性荧光,再进行FITC―抗小鼠IgG(二抗)的孵育,最后封片观察。其结果A抗原呈现绿色荧光,B抗原呈现红色荧光。

        此法应注意两种一抗在混合稀释时,抗体的终浓度应为每一种抗体的工作浓度。换言之,混合后的液体要同时满足两种一抗的工作浓度。若两种一抗种属来源相同,必须分两次进行双重染色,即先用第一种一抗和第一种荧光二抗对A抗原进行染色,洗涤后,用第二种一抗和第二种荧光二抗对B抗原进行染色,否则会出现交叉反应而使染色无特异性。

        user-title

        府宅

        有帮助

        需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验,从中发现最佳的稀释比例。如果说明书没有推荐稀释比例,仅注明“Use at an assay dependent dilution”,就需要做大量的预实验来摸索最佳的比例了。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        两种一抗在混合稀释时,抗体的终浓度应为每一种抗体的工作浓度。混合后的液体要同时满足两种一抗的工作浓度。

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