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求助贴 科研小白进入瓶颈期
灵枢天问
你要不要考虑换个抗体试试😂 ,或者在组织里试一下
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问
K562细胞培养过程中如何去除死亡细胞碎片?
汤姆卜丽波
试试低速离心,应该有点小效果的
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问
有用细胞刮处理巨噬细胞的友友求分享一下经验?
bamboopiggy
不要用那种塑料的硬的细胞刮,去买那种橡胶的,软的细胞刮,我去找我的了,看不到牌子
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问
肿瘤原代肿么养啊?养不好啊!
bamboopiggy
一般肉瘤恶行度较高,好养活的。养不好,就是你有些条件不对,一个一个换了摸摸试试吧
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问
Rasa3flox/floxCD4cre是什么小鼠呀?
bamboopiggy
Rasa3flox/floxCD4cre是在cd4阳性细胞中,特异性敲除rasa3基因的小鼠。cd4 cre,代表的是cd4 阳性细胞特异性cre
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问
HT22细胞OGD模型
bamboopiggy
加cck8,不用换液啊,如果是怕药物和cck8相互作用,可以换液,cck8只对活细胞起作用,所以问题不大。至于你说的时间点,可能你细胞铺的variation就大。可以重复一下试试。
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问
求助:crispr-cas9敲除致死基因
bamboopiggy
这个你只能自己设计,建议导入的外源基因为抗性基因,会更方便操作
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问
荧光定量PCR时应该注意什么?
Eason老歌迷
它的关键步骤在于RNA的抽提和引物的设计。RNA的抽提需要严格进行RNase free的操作,抽提的RNA OD260/OD280需严格控制在1.9-2.1之间。引物设计主要的考虑是其PCR反应特异性好和扩增效率高,进行PCR反应时无非特异性的条带和引物聚合体出现,尽量选取GC含量在40-60%的区段进行扩增。另外,还需要适应荧光定量PCR仪上机条件的设定,退火温度在55-65℃之间。除此之外,其
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问
用细菌刺激水产动物的话(类似鳖)它一般采用什么方式?注射还是直接灌菌?差不多多久能产生黑色素哇
汤姆卜丽波
我们处理斑马鱼是创伤处理,然后浸泡
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问
如何防止pcr形成引物二聚体
Eason老歌迷
引物二聚体其实就是一对引物或者引物自身的 3’ 端部分碱基互补结合,在 Taq 酶的作用下从 3’ 末端延伸所形成的小分子量的双链 DNA 片段。可以通过下面的方法来进行:比如说重新设计引物,增加模板用量,减小引物浓度,引物长度适中,提高退火温度,减少循环次数等等。
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问
RNA提取后进行逆转录,引物扩增后跑胶发现没有条带,可能的原因是什么?
bamboopiggy
rna反转录不成功,引物不特异,机器有问题,产物太小,可能需要用page胶。
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问
pcr时一个体系放2对引物,为什么一个带强,一个带弱,是需要特殊的反应体系吗,单独批条带都很亮
bamboopiggy
因为那个亮的带的引物结合能量更强,或者是亮的那条带短,没事
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问
目前哪种高保真酶pcr保真度最好?后续用于NGS建库测序
bamboopiggy
只要标了高保真的都可以,现在的酶都好使
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问
pcr时,扩增>5000bp片段。使用普通taq酶,还是高保真酶,更容易扩增出来?
灵枢天问
高保真酶啊,你这个片段也挺长的
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问
双酶切体系,BamH I30℃和Xho I37℃。如果分布酶切,官网写的1×K Buffer要用10×的稀释吗?如果一步酶切,温
bamboopiggy
不能一步酶切,俩温度不一样,最好分开切。buffer是要用10X的稀释成1X的
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问
红色荧光蛋白质粒转hek293t不亮怎么办
bamboopiggy
可能是你质粒构建有问题,尤其是diRed,容易产生移码,先检查质粒,如果没有问题,可以进行流式分选后,再做。
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问
近交系C57如何快速大量繁殖
bamboopiggy
怎么繁殖,超过10代,总会产生遗传漂变。如果10代以内,可以直接雌雄合笼,得到想要的鼠。
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问
我想敲掉一个基因,过表达另一个基因,是找公司给我做质粒转染进细胞么?
bamboopiggy
你想自己做也可以啊,找公司也行,看你的经费情况。
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问
NF-kB活化的验证
汤姆卜丽波
我们测的都是核内,还是核内稳妥一点
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问
求各位大神看看我这细胞是不是污染了😭
天一湖医者
从图片上看,这个细胞污染几率非常大。
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