基因敲除后验证问题。
实验小助理静静
做敲除用的是infusion的方法将上下游同源臂和抗生素连在一起，电转化到菌株里后，在抗生素培养基中有长！但是菌液pcr验证敲掉部分也跑出条带了（敲掉部分设计引物）！想知道为什么敲除失败，在抗生素中也可以长？敲除后菌株是长得很慢吗？等待菌株长出来过程是否要补加抗生素呢？？
希望有经验的前辈指点一下，谢谢大家！！
2 个回答
天一湖医者
有帮助
首先你要考虑，你所加的抗性浓度是否足够，在你要做的细菌中的抗性浓度与所使用的浓度不是一致的。其次，你的自杀载体真的进去了吗，电转真的转化进去了。再者你要双交换或者单交换的同源区有多大呢，不同菌对同源区要求很不一样；
bamboopiggy
有帮助
你这个可能是敲入了一个allel，没有敲掉另外一个，建议pcr找全敲掉的，另外抗生素可以补加
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