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问
q-pcr验证高通量测序结果,结果为啥反复横跳?
汤姆卜丽波
这样的结果是不行的,三次独立重复的话。每次都要提RNA之后测浓度,必要时还要跑胶防止降解
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问
EP凝胶的聚合缓冲液是什么?
dxywode
琼脂糖凝胶电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
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问
电转导质粒总是不成功?
dxy_g9y5gije
首先你考虑一下感受态细胞有没有问题,考虑转其它成功过的质粒尝试其次考虑一下其他转导方式比如说化学转导
4 回答
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问
悬浮细胞做转染,lip3000,6孔板每孔种多少细胞转染效率比较高,现在种15万个细胞每孔,感觉转染效率不高
dxywode
如遇转染效果不佳,可采取优化方案对实验进行优化:1. 优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2. 同时细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。转染细胞用的质粒必须保证无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。3. 转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。如果质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他
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问
关于gDNA基因组DNA
汤姆卜丽波
一般pcr.扩增模板浓度几ng到100ng都可以,普通的酶就可以扩出来,应该不是浓度的问题,跑之前确定一下模板没有降解,然后引物特异性和有效率
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问
imageJ处理WB条带时,为什么要去背景?去背景的原理是什么?
balalaLy
imageJ读取的是所选区域的灰度值,如果不去背景,会干扰读取值,结果偏差会很大
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问
染色体做完镜下看是实心的,像一个细的木棍
dxywode
只能是大概说一下,因为缺少图,其实你多看一些片子就会发现,做核型分析的时候,视野中出现的结构应该有分离良好的染色体,边缘很粗糙的圆形,边缘光滑的圆形大致三种类型。边缘粗糙的那种就是染色质在形成染色体的过程中。丝状的染色质盘绕在一起,是很难分开的,表现出来就是一个圆形的细胞核的样子。
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问
做qPCR必须每次要做三个生物学重复和三个技术重复吗
balalaLy
技术重复是同样的sample在一次pcr实验中重复三个复孔,你加样熟练的话也可以只做2个复孔。三次生物学重复是收三批sample
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问
qPCR中Mg2+浓度控制在哪个范围比较合适?
bamboopiggy
一般情况下Mg2+浓度为1.5~2.0mmol/L为宜。但是现在的qpcr的酶一般都是mix,已经给加好Mg2+了,不需要单独加
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问
RT值过高。最近实验细胞给药后杀伤效果跟之前相近,但同样方法下做出的RT值过高,有时候能超过40,大家帮忙提提问题
bamboopiggy
你说的是CT值过高吧?超过40基本代表没有什么表达了。要不你试试降低药物浓度,有部分细胞能活的情况下做这个实验。
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问
反转录同样按试剂盒建议量加,之后由SYBR染料法改为taqman探针法,结果曲线非常乱,不具有特异性,怎么改进
bamboopiggy
跟反转录和sybr的 关系不大,可能是你taqman探针法的引物有问题
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问
石蜡包埋的样品如何检测miRNA?
bamboopiggy
有试剂盒啊,你直接买个试剂盒来提取就可以。你直接在搜索引擎里搜:石蜡包埋样品 miRNA 提取 既可以找到。
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问
做qpcr 时候设计引物一定要垮内含子嘛?
dxy_jrj59zn3
你的意思是引物设计在两个外显子的连接点上吧?其实可以把两条引物分别在两个外显子上,这样应该会比较好
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问
qPCR实验平行的孔总是重复性很差,该怎么改进呢?加样时有推荐的先后顺序吗?
balalaLy
每个孔加的量很低,要留意一下有没有把样品都完全打出去了,枪头上有没有残留
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问
qPCR的实验数据如果有很多该怎么处理呢?数据少还能一点一点算,但是多的话,真的很头疼啊
whilt-shirt
可以做一个Excel公式模板,数据复制后就能直接得出结果
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问
我想问下关于circRNA环状特性鉴定实验
bamboopiggy
1.RNase R消化检测 RNase R是一种来源于大肠杆菌的核酸外切酶,它可以沿RNA的3’-5’方向切割、降解RNA,能够消化几乎所有的线性RNA分子,但不易消化呈环形的RNA、套索结构或3’端突出末端少于7 nt的双链RNA分子。RNase R检测并非是必须的,但可以作为一个很典型的实验证明和鉴定circRNA。RNase R主要用于circRNA的鉴定和富集实验,需要根据具体的实验内容和
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问
求助荧光定量PCR的结果分析 RQ min和RQ max的算法?
天一湖医者
∆Ct SD =SQRT(Ct targetSD^2+Ct referenceSD^2
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问
跑荧光定量pcr 曲线有双峰,primer设计引物分数是满分,求大神给个建议。
balalaLy
如果是主峰前面出峰,一般是引物二聚体,如果是后面,可能是非特异扩增,可降低引物浓度,退火温度和镁离子浓度
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问
PD-1的流式抗体要怎么选择?
balalaLy
一种抗原就对应一种抗体(各种剪切体、修饰后的另说)
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1303 围观
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问
培养液中病毒rna提取
天一湖医者
不同厂家的对比,可以参考一下选择。
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